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CAS | 詳見說明書 | 純度 | 詳見說明書 |
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分子量 | 詳見說明書 | 分子式 | 詳見說明書 |
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100管/96樣 |
貨號 | GOY-01S6411 | 應用領域 | 化工 |
主要用途 | 產品僅用于科研 |
商品介紹:
活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產物過氧化物和羥化物等,研究表明,機體95%以上的活性氧(ROS)都來自于線粒體,其失衡所致的氧化應激與細胞生長增殖、發育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程有關。
正常情況下,細胞內抗氧化防御系統與氧自由基處于平衡狀態,細胞內活性氧(ROS)水平維持在較低的生理范圍;在病理情況下,細胞內抗氧化系統與氧自由基的平衡被打破,細胞內活性氧水平過多,就可破壞線粒體酶類、脂類和核酸,使機體出現氧化應激,同時,活性氧還可攻擊線粒體DNA產生氧化損傷,導致線粒體ATP合成減少、線粒體膜電位破壞等結構和功能變化。
因此,通過檢測活性氧的變化來判斷線粒體的功能是否正常具有重要意義。
測定原理:
熒光探針-還原型二氯熒光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluorescin diacetate, DCFH-DA)可擴散通過線粒體膜,在線粒體內被酯酶水解,形成無熒光的DCFH,DCFH迅速與ROS反應生成熒光物—氧化型二氯熒光素(2', 7'-dichlo rofluorescin, DCF)。 根據上述原理設計了利用熒光法直接定量檢測線粒體ROS產生速率的方法。將熒光強度隨時間變化的數據點擬合,線性回歸直線斜率與ROS產生的速率呈正比。
需自備的儀器和用品:
多功能酶標儀、恒溫培養箱、分析天平、可調式移液器、冰、蒸餾水。
產品名稱:線粒體活性氧產生速率(ROS)熒光法測試盒
規格 : 100管/96樣
測試方法: 熒光法
貨號:GOY-01S6411
分類:氧化與抗氧化系列
試劑的組成和配制
提取液一:液體50mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑二:液體18μL×1瓶,4℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑四:液體50mL×1瓶, 4℃保存;
測定步驟
1、 分光光度計預熱30min以上,調節波長至340nm,蒸餾水調零。
2、 將試劑一、二、三37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預熱10分鐘。
3、 加樣表:
樣本的前處理
①總FBP酶提取:建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一),冰浴勻漿后于4℃,200g離心5min,棄沉淀,取上清在4℃,8000g離心10min,取上清用于測定胞漿FBP酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定葉綠體中FBP酶活性。
建議測定總FBP酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FBP,則按照步驟②提取粗酶液。
FBP活性計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
FBP(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總:反應體系總體積,1×10-3 L;ε:NADPH摩爾消光系數,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.1 mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g。
【友情提示】:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細閱讀購買說明!
非變性蛋白分子量標準25mg Hydroxystilbamidine 10mg
蛋白質電泳分子量標準 (3.3-20.1KD)15 次 HRP 標記的兔抗 GST 標簽多抗20μL
蛋白質電泳分子量標準 (14.4-97.4KD)20 次 HRP 標記的抗抗體10μL
蛋白質電泳分子量標準 (43.0-200.0KD)10 次 His 標簽蛋白專用蛋白酶抑制劑10mL
預染蛋白質電泳分子量標準 (14.4-97.4KD)10 次 Hemoglobin(NO 清除劑 )1g
Forskolin( 腺苷酸環化酶激活劑 )1mg Catalase( 抗氧化酶 )200mg
Genistein( 蛋白激酶抑制劑 )25mg Carboxy-PTIO( 清除劑 )5mg
Glucosamine( 胰島素抵抗誘導劑 )5g Carboxy-PTIO( 清除劑 )50mg
GSH( 抗氧化劑 )1g Canavanine,sulfate(iNOS 抑制劑 )100mg
H-89.2HCL(PKA 抑制劑 )5mg Camptothecin( 喜樹堿 )100μL
大鼠α1抗前體(pre-α1-AT)elisa分析檢測試劑盒
大鼠α1抗前體(pre-α1-AT)elisa檢測試劑盒
大鼠α1抗胰糜蛋白酶(AACT)elisa檢測試劑盒
大鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)elisa分析檢測試劑盒
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線粒體活性氧產生速率(ROS)熒光法測試盒液體蛋白純化回收試劑盒50 次 SDS-PAGE 上樣液,5×1mL
石蠟包埋組織蛋白提取試劑盒50 次 SDS-PAGE 上樣液,5×10mL
昆蟲細胞裂解液50mL SDS-PAGE 濃縮膠配膠液500mL
植物總蛋白質微量提取試劑盒 (SDS-PAGE)30 次 SDS-PAGE 分離膠配膠液500mL
植物總蛋白質微量提取試劑 (2DE) 30 次 SDS-PAGE 電泳液 ( 干粉 )5L
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