| 供貨周期 |
現(xiàn)貨 |
規(guī)格 |
1×10^6 |
| 貨號(hào) |
BH3525 |
應(yīng)用領(lǐng)域 |
醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
HepaRG 人肝癌細(xì)胞
產(chǎn)品貨號(hào)：BH3525
產(chǎn)品規(guī)格：1×10^6
細(xì)胞鑒定STR鑒定已通過
細(xì)胞來(lái)源國(guó)外
細(xì)胞背景建立于年齡未知的女性丙肝患者。來(lái)源于單一供體。
細(xì)胞特性 形態(tài)：上皮樣,貼壁生長(zhǎng)。 用途：僅供科研使用。
HepaRG 人肝癌細(xì)胞
細(xì)胞鑒定STR鑒定已通過
細(xì)胞來(lái)源國(guó)外
細(xì)胞背景建立于年齡未知的女性丙肝患者。來(lái)源于單一供體。
細(xì)胞特性 形態(tài)：上皮樣,貼壁生長(zhǎng)。 用途：僅供科研使用。
培養(yǎng)條件1）準(zhǔn)備William's E+ FBS 10%+2mM 谷氨酰胺+5.25ug/ml 胰島素+50uM 氫化可的松+P/S 1%
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。注意事項(xiàng)
1.培養(yǎng)密度不要超過80%，密度過高時(shí)細(xì)胞可能自發(fā)分化。
2.包被試劑對(duì)這個(gè)細(xì)胞影響不是特別大。如果用包被試劑會(huì)更好，不用的話，貼壁弱一些，但不會(huì)影響細(xì)胞的狀態(tài)，包被試劑包被培養(yǎng)皿讓細(xì)胞更好貼壁，推薦使用：Applied Cell Extracellular Matrix (G422)
3.若使用包被試劑，這個(gè)細(xì)胞消化時(shí)間比較長(zhǎng)，放在培養(yǎng)箱里消化是 4-6min左右（細(xì)胞消化時(shí)間與所用胰酶效價(jià)、消化時(shí)候細(xì)胞密度、細(xì)胞貼壁強(qiáng)弱以及溫度等因素有關(guān)，建議第一次消化時(shí)候，多在顯微鏡下觀察，以找到優(yōu)良消化時(shí)間）。
HepaRG 人肝癌細(xì)胞貼壁細(xì)胞參考：
一. 收貨后消毒靜置待細(xì)胞全部穩(wěn)定后拍照。棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
二. T25瓶加入0.25％EDTA胰蛋白酶1-2ml于培養(yǎng)瓶中震蕩混勻，如果屬于貼壁不牢固的細(xì)胞很容易脫落的就培養(yǎng)箱外面消化震蕩等脫落90%以上終止消化，一般小于1分鐘以內(nèi)，甚至不加胰酶有部分貼壁非常不牢固的細(xì)胞也會(huì)自然震蕩脫落。如果是貼壁牢固的細(xì)胞則置于37℃培養(yǎng)箱中消化提高效率，每40-50秒拿出培養(yǎng)箱震蕩幫助細(xì)胞脫落，如果脫落90%以上則對(duì)應(yīng)3-6ml含有10%血清的培養(yǎng)基終止結(jié)束，以防胰酶殘留。如果貼壁非常牢固的細(xì)胞，脫落的比例比較低，也不超過2分鐘后終止消化結(jié)束，再加入1ml培養(yǎng)基讓細(xì)胞緩沖后再過2分鐘進(jìn)行二次消化，反復(fù)分步消化以降低單次消化時(shí)長(zhǎng)，減少刺激，保護(hù)細(xì)胞膜。或采用刮產(chǎn)刮細(xì)胞的方式處理也可以。總歸原則是達(dá)到消化目的的同時(shí)減少細(xì)胞膜受到的損傷越小越好。
三.消化完成后輕輕吹勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶/6cm培養(yǎng)皿中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。期間多的細(xì)胞一定保存多份細(xì)胞凍存管備種。
運(yùn)輸形式常溫發(fā)貨：收到后T25瓶消毒再放置培養(yǎng)箱靜置2-6小時(shí)后觀察密度和狀態(tài)并拍照2-3張反饋給銷售，密度達(dá)標(biāo)就可以傳代。前期傳代比例1:2，等再次長(zhǎng)滿后傳代時(shí)建議凍存其中一整瓶成1個(gè)1ml凍存管，另外一瓶繼續(xù)傳代，反復(fù)凍存足量種子后才擴(kuò)增做實(shí)驗(yàn)，以防突發(fā)情況引起斷種。
干冰發(fā)貨：常規(guī)細(xì)胞發(fā)貨凍存管2只，復(fù)蘇1只，另外一只備用，第一個(gè)復(fù)蘇不成功時(shí)嚴(yán)格按照廠家要求復(fù)蘇第二個(gè)，均沒有復(fù)蘇成功的情況及時(shí)留存復(fù)蘇照片通知銷售處理售后問題。
生物安全1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。
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