諾博萊德 溶酶體蛋白提取試劑盒

NobleRyder  EX9018 溶酶體蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品貨號：EX9018

產(chǎn)品名稱：溶酶體蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T /100T

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：溶酶體蛋白提取試劑盒

規(guī)格：50T ; 100T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

NobleRyder  EX9018 溶酶體蛋白提取試劑盒產(chǎn)品介紹

適用樣本：動物細胞/組織

產(chǎn)品介紹

溶酶體是由一層單位膜包圍，內(nèi)含多種酸性水解酶的泡狀結(jié)構(gòu)。溶酶體含有 40 多種水解 酶，其中包括蛋白酶、核酸降解酶和糖苷酶等。其主要功能是對細胞內(nèi)物質(zhì)的消化作用。此 外溶酶體與器官形成、激素分泌的調(diào)節(jié)以及某些疾病的發(fā)生密切相關(guān)。

溶酶體蛋白提取試劑盒提供全套試劑，可用于各種動物細胞和實體 軟、硬組織樣本的溶酶體蛋白提取。適用于從各種原代或傳代細胞和各種實體組織，如腦、 脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織等動物組 織中提取溶酶體總蛋白。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻 止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。 

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性 分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。 

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

使用前請注意：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài) 后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完！

自備試劑和儀器：

離心機、振蕩器、勻漿機/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒， 離心管、吸頭、一次性手套。

產(chǎn)品特點：

1. 使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。

2. 提取過程簡單方便。

3. 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4. 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

5. 總蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止 沉淀。

6. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白 酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、PepstatinA、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某 一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括si氨酸 蛋白酶、半guang氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

操作步驟：

一、使用注意事項

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預(yù)實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得最佳實驗效果

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試 劑損失。

3. 實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

4. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

5. 如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

6. 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

7. 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制 劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。

8. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

9. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

二、溶酶體蛋白提取

提取液準備：

每200μL冷的蛋白提取液C中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

細胞溶酶體蛋白提取

1. 取1-2×107個細胞，在4℃，500×g條件下離心2-3min，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細胞。

2. 用冷PBS洗滌兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

3. 加入500μL-1000μL冷的試劑A，置冰上振蕩10min。

4. 用Dounce勻漿器勻漿30-40下。

5. 在4℃，1000×g條件下離心5min，棄沉淀，留上清。

6. 將上清在4℃，4000×g條件下離心10min，棄沉淀，留上清。

7. 將上清在4℃，20000×g條件下離心20min，棄上清，留沉淀。

8. 在沉淀中加入500μL冷的試劑B，混勻。

9. 在4℃，20000×g條件下離心20min，棄上清，留沉淀。

10. 在沉淀中加入100-200μL蛋白提取液C，充分混勻。

11. 輕微振蕩15-30min。

12. 在4℃，12000×g條件下離心15min。

13. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即得到溶酶體總蛋白。

14. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?strong>

組織溶酶體蛋白提取：

1. 取50-100mg新鮮動物組織樣本，用PBS洗滌干凈。

2. 用剪刀盡可能剪碎，用冷PBS洗滌兩次。

3. 加入500μL-1000μL冷的試劑A，置冰上10min。

4. 用Dounce勻漿器勻漿30-40下，至無明顯可見固體。

5. 在4℃，1000×g條件下離心5min，棄沉淀，留上清。

6. 將上清在4℃，4000×g條件下離心10min，棄沉淀，留上清。

7. 將上清在4℃，20000×g條件下離心20min，棄上清，留沉淀。

8. 在沉淀中加入500μL冷的試劑B，混勻。

9. 在4℃，20000×g條件下離心20min，棄上清，留沉淀。

10. 在沉淀中加入100-200μL蛋白提取液C，充分混勻。

11. 輕微振蕩15-30min。

12. 在4℃，12000×g條件下離心15min。

13. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即得到溶酶體總蛋白。

14. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?strong>

注意事項：

1. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留 清潔劑。

3. 實驗完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

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