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DNA 修復混合液 150 次*使用方法:
1. 以 30 uL 的標準 PCR 反應體系為例,如果反應體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補水到 30 uL
2. 按已經優化的 PCR 條件進行一定循環數的 PCR(循環數與突變率的關系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯 PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結束后做延伸處理。
3. 電泳檢測是否得到預計長度的 PCR 產物。
DNA 修復混合液 150 次*產品及特點:
易錯 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當的選擇方法,則可從構建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規 PCR 的比較如下:本產品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發,本產品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學研究領域顯示出了它的*性。
2. 配方經過精心優化,突變率穩定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設計位點,則可使產物克隆到表達載體,也可以用于體內蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續易錯 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增 1kb 以下的產物,對于 1kb 以上的產物,建議分段擴增。
產品介紹:
規格及成分:
EYFP
Kaede
L3790
lambda gt10(lambdagt10)
mCardinal
p3xFLAG-CMV-13(p3xFLAGCMV13)
pAcGP67-B(pAcGP67B)
pAG424GAL-Cerulean-ccdB(pAG424GALCeruleanccdB)
pARO180
pBAD24(60908-610)y
pBiFC-bFosVC155(pBiFCbFosVC155)
pBPV-1 9-1(pBPV19-1)植物桿菌 Lactobacillus plantarum
香菇 Lentinula edodes
人胃細胞英文名稱:SGC-7901
MDA-MB-231, 人腺細胞 Human
地衣芽孢桿菌 Bacillus licheniformis
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
C127(小鼠腺細胞)5×106cells/瓶×2
爪哇根霉 Rhizopus javanicus
假單胞菌 Pseudomonas sp.
COS-7(非洲綠猴SV40轉化的腎細胞)5×106cells/瓶×2
戊糖桿菌 Lactobacillus pentosus
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
異常漢遜酵母異常變種 Hansenula anomala var. anomala
豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna
M-NFS-60 (小鼠白血病細胞G-CSF依賴性)5×106cells/瓶×2
植物桿菌 Lactobacillus plantarum
醋酸鈣不動桿菌 Acinetobacter calcoaceticus
大鼠關節軟骨細胞*培養基100mL
pCAMBIA1300(60908-1220)
pcDNA3.1(+)/myc-His B(60908-1530)y
pcDNA6/V5-His A(pcDNA6V5HisA)
pCMV-BD(pCMVBD)
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