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dCTP 溶液,100mM0.5mL實驗步驟產品及特點:
易錯 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當的選擇方法,則可從構建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規 PCR 的比較如下:本產品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發,本產品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學研究領域顯示出了它的*性。
2. 配方經過精心優化,突變率穩定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設計位點,則可使產物克隆到表達載體,也可以用于體內蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續易錯 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增 1kb 以下的產物,對于 1kb 以上的產物,建議分段擴增。
dCTP 溶液,100mM0.5mL實驗步驟產品介紹:
規格及成分:
使用方法:
1. 以 30 uL 的標準 PCR 反應體系為例,如果反應體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補水到 30 uL
2. 按已經優化的 PCR 條件進行一定循環數的 PCR(循環數與突變率的關系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯 PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結束后做延伸處理。
3. 電泳檢測是否得到預計長度的 PCR 產物。
pSMART HCAmp
pSV3-dhfr(pSV3dhfr)
pTagYFP-N(pTagYFPN)
pTracer-EF/V5-His B(pTracerEFV5HisB)
pTurboGFP-N(pTurboGFPN)
pUltra-hot
pVT66
pYC2-E(pYC2E)
RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen1(RNAiReadypSIRENRetroQZsGreen1)
V181 pLPS 3' Triple-Flag - Acceptor(V181pLPS3'TripleFlagAcceptor)
YEp358
YRp15-leu2delta1(YRp15leu2delta1)
陶瓷研缽(直徑75 mm)豌豆根瘤菌 Rhizobium leguminosarum
MGC80-3(MGC-803)人胃細胞gersion
地衣芽孢桿菌 Bacillus licheniformis
青霉菌 Penicillium sp.
人腸微血管內皮細胞*培養基100mL
普通變形桿菌 Proteus vulgaris
膠韌革菌 Gloeostereum incarnatum
中性紅染色液規格:100ml
大鼠甲狀腺上皮細胞*培養基100mL
屎腸球菌 Enterococcus faecium
中慢生華癸根瘤菌 Mesorhizobium huakuii
NCI-H23(人非小細胞肺細胞)5×106cells/瓶×2
桿菌屬 Lactobacillus sp.
無花果曲霉 Aspergillus ficuum
靈芝 Ganoderma lucidium
褐球固氮菌 Azotobacter chrooccum
豬胃消化粉
Alkalophilic halophile medium
Bacillus thermantarcticus medium
Caminibacter mediatlanticus medium
Clostridium sticklandii medium
Desulfobacterium cetonicum medium
Desulfuromonas medium (tce)
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