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在正常情況下，各種藥物以一定的比率與血漿蛋白結合，在血漿中常同時存在結合型與游離型，而只有游離型藥物才具有藥物活性。血漿蛋白結合率（plasma protein binding, PPB）實驗的主要目的即是測定藥物與血漿蛋白的結合程度，即藥物進入血液后，與血漿蛋白結合的藥量占血液藥物總量的比率‌。血漿蛋白結合率反映了藥物在體內的分布情況，對于評估藥物的療效和副作用具有重要意義‌。

血漿蛋白結合率試驗

目前常見的測定血漿蛋白結合率的方法有平衡透析法（Equilibrium dialysis, ED）、超濾法（Ultrafiltration, UF）及超速離心法（Ultracentrifugation, UC）等。

【平衡透析法】

原理：ED采用半透膜分割的兩隔室裝置進行測定，一側加入含藥的蛋白溶液，另一側加入空白的緩沖液，此條件下僅游離藥物可以自由穿過半滲透膜，孵育一段時間，兩側達到平衡后兩側的游離藥物濃度相等，結合態的藥物仍然停留于蛋白溶液側，通過測定兩側的藥物濃度即可算得PPB。

優點：無需施加壓力；

         具有高通量潛力；

         操作容易；

         溫度和pH值可控；

         樣品量低。

缺點：需要大量等離子體和較長的平衡時間；

         不適合不穩定的化合物；

         不能用于高度疏水化合物。

【超濾法】

原理：UF采用半透膜分隔的兩隔室裝置進行測定。含藥蛋白溶液加入上層隔室，在外界壓力或者離心條件快速的使游離藥物運動至下方buffer側，通過測定兩側化合物濃度計算PPB。

優點：試驗時間短，可顯著減少酯酶代謝、蛋白稀釋和蛋白滲漏造成的試驗偏差。

缺點：藥物非特異性結合效應較明顯，尤其對于高脂溶性化合物。

【超速離心法】

原理：UC利用非常高的離心力（625000g）來分離游離態和結合態藥物。離心之后結合態的藥物與血漿蛋白一起分布于底層，中間層即為游離藥物分布層，最上層為極低密度的脂蛋白和乳糜微粒漂浮物。通過測定中間層和離心前初始藥物濃度即可算得PPB。

優點：具有時間短、樣品需求量小、非特異性吸附效應弱和消除膜相關問題的優勢。

缺點：成本相對較高，在超速離心的作用下可能改變化合物的結合平衡。

其中，由原理可知，平衡透析法（ED）是一種濃度驅動的過程，通過具有不同分子量截斷點（MWCO）的選擇性和可滲透性膜孔（如8K或12K MWCO）的擴散將小體積血漿中的游離蛋白結合藥物分離出來。由于沒有施加外力（如壓力），ED被認為是研究蛋白質相互作用的真實性黃金標準。

IPHASE遵循黃金標準，設計、開發由不銹鋼手柄、不銹鋼壓板、特氟龍版、不銹鋼連桿及底座組成的傳統平衡透析裝置。該裝置利用濃度驅動的方法，輔以3.5Kd，12-14Kd，25Kd或50Kd的平衡透析膜（依據藥物分子量選擇），于37℃、5% CO2培養箱中孵育16小時，助力客戶PPB試驗驗證。該裝置更適合一些試驗體量大，且成本控制要求高的客戶。但傳統的平衡透析法也有需要大量等離子體和較長的平衡時間等缺點，此時，快速平衡透析裝置就更為適用。

IPHASE快速平衡透析裝置

IPHASE/匯智和源作為體外研究生物試劑引·領者，基于平衡透析法（ED）存在的問題，升級、開發出一種快速平衡透析裝置，解決傳統ED技術需要大量等離子體和較長的平衡時間的問題。

IPHASE快速平衡透析裝置，由含透析池、含透析膜的插件及底板組成，透析池內通過插件和透析膜圍合形成一個獨立的透析膜室，而所屬透析池內且處于透析膜室的外圍部分為緩沖液室，如下圖所示：紅色部分極為含透析膜的插件，其內添加含藥的血漿等待測試驗，白色孔則為PBS添加孔。

IPHASE快速平衡透析裝置的創造結合了平衡透析（ED）技術，該裝置也是由濃度驅動，通過具有不同分子量截斷點（MWCO）的選擇性和可滲透膜孔的擴散將小體積血漿中的游離蛋白結合藥物分離出來。它較普通的平衡透析裝置具有易于使用、高表面體積比、高通量、靈活性、確定性、可重現性和準確度等多重優點，是PPB試驗的又一大利器！

為驗證裝置的實用性，IPHASE技術人員以SD大鼠血漿蛋白結合試驗為例，使用華法林為陽性藥物，在37℃、5% CO2培養箱中振蕩孵育6小時。其中，Rat-6h是試驗組，結果顯示其血漿蛋白結合率高于99%，滿足試驗血漿蛋白結合率≥98%的要求；Rat-6h-PBS是陰性對照組，結果顯示兩側陽性對照物可以透過半透膜，兩側數據接近一致，進一步驗證試驗的準確性。

由此說明，IPHASE/匯智和源快速平衡透析裝置研發成功。其操作方便、均一性好，無需客戶自行操作透析膜，且避免了普通透析裝置由于使用時間久導致彈簧松緊不合適造成的漏液現象，是大部分客戶的最·優選擇！

IPHASE相關產品

鑒于此，IPHASE為滿足不同客戶的多種需求，就快速平衡透析裝置，成功設計、研發出一次性/重復性底板及兩種不同規格的插件，同時還有多種適用于兩款平衡透析裝置的輔助產品及其它相關產品，具體信息如下表所示：

IPHASE/匯智和源憑借多年的研發經驗，推出了多領域、多種類的高·端科研試劑，為藥物早期研發提供篩選工具，為生命科學領域的探索提供新材料、新方法和新手段，為食品、藥品、化學品等的遺傳毒性研究提供便捷產品，望廣大科研工作者咨詢。

發    文    章    得    獎    勵

凡使用本公司產品，在國內及國際刊物上發表論文（論文發表日起一年內），并注明產品屬于IPHASE BIOSCIENCES Co.,Ltd. / 匯智和源生物技術（蘇州）有限公司所有，即可申請獎勵。根據發表刊物影響因子不同，給予不同金額獎品：

非SCI論文及IF≤5分，500元禮品；

5分＜IF≤8分 800元禮品；

8分＜IF≤10分 1000元禮品；

IF≥10分 2000元禮品；

注：①禮品卡也可兌換同等金額產品購買抵用券；

      ②如遇我司公司名稱書寫不規范或不是第一作者

        等情況，對應給予獎品金額將發放50%；

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關    于    我    們

匯智和源，致力于為創新藥研發企業及生命科學研究機構提供高品質的生物試劑，IPHASE為公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。

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