諾博萊德 ECL Plus超敏發(fā)光液,ECL超敏發(fā)光液,ECL發(fā)光液,ECL Western Blotting Substrate

ECL Plus超敏發(fā)光液 顯色與信號(hào)檢測(cè)

產(chǎn)品貨號(hào)：PE8898

產(chǎn)品名稱：ECL Plus超敏發(fā)光液,ECL超敏發(fā)光液,ECL發(fā)光液,ECL Western Blotting Substrate

產(chǎn)品規(guī)格：2*12.5ml / 2*50ml / 250ml*2

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

別名：ECL超敏發(fā)光液 ECL發(fā)光液

英文名稱：ECL Western Blotting Substrate

中文名稱：ECL Plus超敏發(fā)光液

規(guī)格：2*12.5ml / 2*50ml / 250ml*2

儲(chǔ)存條件：2-8℃，avoid light，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品介紹

NobleRyder  PE8898  ECL Plus超敏發(fā)光液,ECL超敏發(fā)光液,ECL發(fā)光液,ECL Western Blotting Substrate直接或間接檢測(cè)與辣根過(guò)氧化物酶HRP關(guān)聯(lián)的蛋白或核酸底物。這一du特的發(fā)光底物系統(tǒng)是目前zui靈敏的商業(yè)化熒光ECL檢測(cè)試劑，具有ji高靈敏度和高信噪比，發(fā)光迅速，熒光可使X感光膠片感光達(dá)12小時(shí)以上，特別適用于痕量蛋白或核酸檢測(cè)。同時(shí)該試劑允許使用更高的抗體稀釋倍數(shù)（1：2000-1：10000），極其節(jié)省抗體。

ECL Plus級(jí)發(fā)光液，是一種可廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)的化學(xué)發(fā)光試劑。實(shí)驗(yàn)效果優(yōu)于市面上某zhiming品牌的超敏級(jí)發(fā)光液。

ECL Plus超敏發(fā)光液與辣根過(guò)氧化物酶進(jìn)行反應(yīng)，產(chǎn)生熒光，可以通過(guò)膠片和相對(duì)應(yīng)的儀器進(jìn)行信號(hào)收集。

ECL Plus靈敏度ji高，是市面上普通DAB的1000倍以上，在western實(shí)驗(yàn)中，HRP標(biāo)記的抗體（1mg/ml）能達(dá)到10萬(wàn)級(jí)稀釋，是某品牌的2-5倍左右。ji高的靈敏度可以讓及大幅度的節(jié)省抗體成為可能，在這種情況下需要降低一抗或者二抗的稀釋度，避免得到的是過(guò)暗的條帶，難以比較。

ECL Plus超敏發(fā)光液發(fā)光時(shí)間長(zhǎng)，將兔的IgG制備成蛋白上樣樣品，進(jìn)行正常的免疫印跡實(shí)驗(yàn)（上面提到的都是這種情況情況下的稀釋度，斑點(diǎn)試驗(yàn)的稀釋度會(huì)更高），在化學(xué)發(fā)光拍照儀器上進(jìn)行信號(hào)收集，在20分鐘后，熒光強(qiáng)度與初始的熒光強(qiáng)度基本無(wú)變化，30分鐘后二抗?jié)舛雀叩臒晒馍杂兴p，其他的基本沒(méi)有變化。

用途：用于HRP標(biāo)記抗體的Western Blot和HRP標(biāo)記探針的核酸雜交。

安全性：無(wú)特殊毒性，按普通化學(xué)品處理。

使用方法（僅供參考）：

1. 常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、HRP 標(biāo)記抗體或核酸探針?lè)跤⑾茨ぁＷ⒁庥?HRP 標(biāo)記 IgG 或用一抗-鏈親 和素-生wu素-HRP 夾心法。核酸雜交膜用 HRP 標(biāo)記探針雜交，洗膜。

2. 在洗滌膜上的 HRP 標(biāo)記二抗的同時(shí)，新鮮配制發(fā)光工作液：分別取等體積的溶液 A 和 B 混合， 放置使之恢復(fù)室溫否則會(huì)減弱熒光強(qiáng)度。建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時(shí)后仍可使用但 靈敏度略有減低。

3. 用鑷子取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜wan全干燥。將膜wan全浸入并與發(fā)光工作液充分接觸（約 0.125mL 發(fā)光工作液/cm2膜）。室溫孵育 3 分鐘后立即壓片曝光。孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)不會(huì)增加靈敏度，有時(shí)還會(huì)導(dǎo)致曝光條帶異常。發(fā)光過(guò)程的本質(zhì)是酶促反應(yīng)，使用過(guò)少的發(fā)光工作液不利于反應(yīng)進(jìn)行，也會(huì)導(dǎo)致膜上條帶曝光不均勻和靈敏度明顯降低。為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小但勿降低發(fā)光液用量。

4. 用鑷子夾起膜，搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液。但勿洗去發(fā)光液。

5. 在 X 光膠片暗盒內(nèi)面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將雜交膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來(lái)wan全包裹雜交膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。 用膠帶將覆蓋雜交膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi)，最好蛋白帶面向上。

6. 在黑暗中放入 X 感光膠片，分別曝光不同的時(shí)間如數(shù)秒到數(shù)分鐘。顯影沖洗。

注意事項(xiàng)：

1. 步驟 1-5 可在日光燈下操作；但發(fā)光液暴露于強(qiáng)光下時(shí)間過(guò)久靈敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的潔凈。

2. 長(zhǎng)時(shí)間曝光或蛋白質(zhì)過(guò)量，將加深背景并使條帶強(qiáng)弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊。

3. 發(fā)光工作液孵育約 3 分鐘后膜上的條帶發(fā)光。強(qiáng)條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見(jiàn)，低豐度蛋白條帶 發(fā)光較弱，肉眼雖不可見(jiàn)但能使 X 膠片曝光。不能單憑肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時(shí)間。肉眼不可見(jiàn)的熒光實(shí)際上可持續(xù)數(shù)小時(shí)并使 X 膠片感光，因而弱帶可曝光 1-10 小時(shí)。如果曝光后條帶不 佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用 ECL 發(fā)光和曝光。

4. 由于超敏發(fā)光液的高靈敏度，強(qiáng)烈推薦大多數(shù)進(jìn)口抗體起始濃度為一抗 1：1000-1：4000，二抗 1：2000-1：5000。抗體濃度過(guò)高將造成高背景或沒(méi)有條帶，導(dǎo)致失敗！

5. 某些市售保鮮膜包裹印跡膜時(shí)會(huì)淬滅熒光，應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜，例如“克林萊”牌保鮮膜。

6. 使用肉眼可見(jiàn)的預(yù)染色蛋白 Marker 和熒光-放射自顯影曝光標(biāo)簽可幫助確定膠片上條帶的準(zhǔn)確 位置和大小。

7. NaN3 能抑制 HRP 活性，回收二抗時(shí)應(yīng)避免使用 NaN3，如必需使用勿超過(guò) 0.01%。

ECL Plus超敏發(fā)光液 顯色與信號(hào)檢測(cè)

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