PE8818 West Femto ECL超敏發(fā)光液 顯色與信號檢測
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號 PE8818
- 產(chǎn)地 北京
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時間 2025/3/18 16:29:59
- 訪問次數(shù) 9
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 2*12.5ml /2*50ml |
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貨號 | PE8818 | 應用領域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
主要用途 | 用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶HRP的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原。 |
諾博萊德West Femto ECL超敏發(fā)光液,West Femto ECL Substrate
West Femto ECL超敏發(fā)光液 顯色與信號檢測
產(chǎn)品貨號:PE8818
產(chǎn)品名稱:West Femto ECL超敏發(fā)光液,West Femto ECL Substrate
產(chǎn)品規(guī)格:2*12.5ml / 2*50ml
產(chǎn)品簡介:
英文名稱:West Femto ECL Substrate
中文名稱:West Femto ECL超敏發(fā)光液
規(guī)格:2*12.5ml ; 2*50ml
純度:>99%
儲存條件:2-8℃,1 year
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準
產(chǎn)品介紹:
NobleRyder PE8818 West Femto ECL超敏發(fā)光液,West Femto ECL Substrate用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶HRP的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原。由于采用了du特的發(fā)光底物系統(tǒng),West Femto ECL超敏發(fā)光液是目前zui靈敏的商業(yè)化熒光ECL檢測試劑:
(1) 具有ji高靈敏度和高信噪比,可檢測10~100 fg抗原;
(2) 可在日光燈下進行發(fā)光操作;
(3) 發(fā)光迅速,熒光可使X光膠片感光達12小時以上,特別適用于痕量蛋白或核酸檢測;
(4) 可使用更高的抗體稀釋倍數(shù)(1:2000~1:10000),極其節(jié)省抗體。
2. 用途:用于HRP標記抗體的Western Blot和HRP標記探針的核酸雜交。
3. 使用方法:
(1)執(zhí)行常規(guī)SDS-PAGE、轉(zhuǎn)膜和Western Blot步驟。注意用HRP標記lgG或用一抗-鏈親和素-生wu素-HRP夾法。
(2)Western Blot最后一次洗膜的同時新鮮配制發(fā)光工作液:分別取等體積的溶液A和B,放入干凈容器中混合。建議立即使用工作液,室溫放置數(shù)小時后仍可使用但靈敏度略有降低。
(3)用鑷子取出膜,搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜wan全干燥。將膜wan全浸入發(fā)光工作液(0.125mL發(fā)光工作液/cm2膜)中,與發(fā)光工作液充分接觸。室溫孵育3分鐘,準備立即壓片曝光。孵育時間過長不會增加靈敏度,有時還會導致曝光條帶異常。發(fā)光過程的本質(zhì)是酶促反應,使用過少的發(fā)光工作液不利反應進行,也會導致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達節(jié)約目的可將膜剪小但勿降低發(fā)光液用量。
(4)用鑷子夾起膜,搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液。但勿洗去發(fā)光液。
(5)打開X光膠片暗盒,在暗盒內(nèi)表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將Western Blot膜貼在保鮮膜上,將保鮮膜折起來wan全包裹Western Blot膜,去除氣泡和皺褶,可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋Western Blot膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi),蛋白帶面向上。
(6)暗房內(nèi)壓X光膠片,分別曝光不同的時間如數(shù)秒到數(shù)分鐘。顯影沖洗。
4. 儲存:4 ℃密封避光保存一年以上。短期可放置室溫。
5. 安全性:無特殊毒性,按普通化學品處理。
6. 注意事項:
(1)步驟1~5可在日光燈下操作;但發(fā)光液曝露于強光下時間過久靈敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。
(2)長時間曝光或蛋白過量,將加深背景并使條帶強弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊。
(3)發(fā)光工作液孵育約3分鐘后膜上的條帶發(fā)光。強條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見,低豐度蛋白條帶發(fā)光較弱甚至肉眼不可見但可使X光膠片曝光。不能簡單以肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時間。肉眼不可見的熒光實際上可持續(xù)數(shù)小時并使X光膠片感光,因而弱帶可曝光1-10小時。如果曝光后條帶不佳,可用洗膜緩沖液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL發(fā)光和曝光。
(4)由于超敏發(fā)光液極其靈敏,強烈推薦大多數(shù)進口抗體起始濃度為一抗1:1000~1:4000,二抗1:2000~1:5000。抗體濃度過高將造成高背景或沒有條帶,導致失敗。
(5)某些保鮮膜包裹印跡膜時可能會淬滅熒光,應選擇高質(zhì)量保鮮膜。
(6)使用肉眼可見的預染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。
(7)NaN3能抑制HRP活性,回收第二抗體應避免使用NaN3,如必需使用勿超過0.01%。
備注:產(chǎn)品信息可能會有優(yōu)化升級。請以實際標簽信息為準。
操作概述:
注:優(yōu)化抗原和抗體的濃度。必須使用建議的抗體稀釋度,以保證陽性結(jié)果。有關(guān)建議的稀釋度范圍請參考其他所需材料。
1) 將一抗?jié)舛认♂尩?1ng 至 0.2 μg/mL(以 1 μg/mL 儲存液稀釋 1:5,000 至 1:100,000 倍)
2) 將二抗?jié)舛认♂尩?2ng 至 10 ng/mL(以 1 μg/mL 儲存液稀釋 1:100,000 至 1:500,000 倍)
3) 將兩種底物組份按 1:1 比例混合,制備底物工作液。注:暴漏于日光或任何其他強光可能損害工作液,為獲得最佳結(jié)果,將此工作液保存在琥珀色瓶中, 并避免長期暴漏于任何強光。短時間暴漏于實驗室常規(guī)照明不會損害該工作液。
4) 將印跡膜在 West Femto ECL 底物工作液中孵育 5 分鐘。
5) 吸出多余試劑。用清潔的塑料膜蓋住該印跡膜。
6) 使印跡膜在 X 光膠片上曝光
蛋白印跡法詳細操作步驟
1) 將印記膜從蛋白轉(zhuǎn)印設備中取出,加入合適的封閉液在溫室下孵育 20-60 分鐘,同時振蕩。以 封閉膜上非特異性蛋白結(jié)合位點。 請注意:使用在前文建議的抗體稀釋度是非常重要的。
2) 將膜從封閉液中取出,與一抗工作液在溫室孵育 1 小時,同時振蕩;或在 28℃孵育過夜,不振蕩。
3) 將足量的洗滌緩沖液加至膜上,保證緩沖液將膜wan全覆蓋。振蕩孵育≥5 分鐘,更換洗滌緩沖液 并重復該步驟 4-6 次。增加洗滌緩沖液體積,洗滌次數(shù)和洗滌時間有助于降低背景信號。
注:孵育前,膜在洗滌緩沖液中的短暫淋洗會提高洗滌效率。 請注意:使用在前文建議的 HRP 標記二抗稀釋度是非常重要的。
4) 將 HRP 標記的二抗工作液與膜在溫室孵育 1 小時,同時振蕩。
5) 重復步驟 3,以除去未結(jié)合的 HRP 標記二抗。
注:膜與 HRP 標記二抗孵育后必須進行che底洗滌。
6) 將 A 溶液與 B 液等比例混合,制備成工作液。每 cm2膜使用 0.01~0.1ml 工作液。工作液可以 在溫室下穩(wěn)定 8 小時。
注:暴漏雨日光或任何其他強光下可能損害工作液,為獲得嘴角結(jié)果,將此工作液保存在琥珀色瓶中,并避免長期暴漏雨任何強光。實驗室的常見照明不會損害工作液。
7) 將印記膜在工作液中孵育 5 分鐘。
8) 從工作液中取出印記膜,并置于一個塑料片或清潔的塑料紙(膜)中,用一張吸水紙吸除多余的液體,并從印記和塑料紙之間小心地壓出氣泡。
9) 將包在塑料紙(膜)中的印記膜置于膠片暗盒中,蛋白質(zhì)面朝上,除適用于膠片曝光的燈(如紅色安全燈)之外,關(guān)閉所有的燈。注意:膠片必須在曝光期間保持干燥,為獲得最佳效果,采取以下措施:
* 確保將多余的底物從膜和塑料紙上wan全去除。
* 在整個膠片處理期間,使用手套。
* 切莫將印記膜置于已顯影的膠片上,因為膠片上的化學物質(zhì)會減弱信號。
10) 將 X 光膠片置于膜的上面。建議第一次曝光 60 秒。之后可調(diào)整曝光時間以達到最佳結(jié)果。化學發(fā)光反應在底物孵育后的前 5-30 分鐘期間是zui強烈的。這一反應可以持續(xù)幾個小時,但強度會隨時間下降,如有底物孵育后較長時間后曝光,曝光時間可能需要延長以獲得較強信號。如果使用 磷光存儲成像設備(如 Bio-Rad 的分子成像儀系統(tǒng))或 CCD 照相機可能需要較長的曝光時間。
注意:膠片與膜之間的任何移動可能在膠片上造成人為的非特異信號。
11) 使用合適的顯影劑和定影劑對膠片進行顯影。如果信號太強,則縮短曝光時間或?qū)⒂∮浤みM行剝離并降低抗體濃度重新檢測。
West Femto ECL超敏發(fā)光液 顯色與信號檢測
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