LumiMAT™ 熱原檢測試劑盒

LumiMAT™是基于MAT法（單核細胞活化反應測定法，Monocyte Activation Test）開發的熱原（Pyrogen）檢測試劑盒。

熱原是導致動物體溫升高的物質的總稱，非口服藥和與直接接觸血液的醫療器械不可被熱原污染。家兔熱原試驗是早期廣泛用于熱原檢測的實驗方法，該方法通過向兔靜脈中注射待測樣品并觀察其體溫變化來判斷是否存在熱原。但家兔熱原試驗在再現性、精確度、成本等方面存在問題，因此鱟試劑作為替代法被廣泛使用。然而，鱟試劑無法檢測出非內毒素熱原，因此必要時也會使用家兔熱原試驗。

MAT法是作為家兔熱原試驗的替代法而開發的In vitro熱原檢測實驗，不僅可檢測內毒素，還能檢測非內毒素熱原。

◆產品概要

本產品是用于檢測非口服藥品和醫療器械中混入或附著的熱原的MAT法試劑，需與LumiMAT Pyrogen Detection Kit - Cells（產品編號：298-36991）配合使用，不僅可以檢測內毒素，還可檢測大部分非內毒素熱原。

◆試劑盒組成

● 細胞用培養基：20 mL

● 稀釋用培養基：100 mL

● 發光檢測緩沖液：12 mL

● 發光底物：240 μL

◆檢測原理

MAT法是利用人單核細胞被熱原激活后產生炎癥細胞因子等物質來檢測熱原的方法。

傳統的MAT法

使用PBMC（外周血單核細胞）作為細胞來源，通過ELISA法檢測單核細胞中釋放的細胞因子，從而檢測樣品中的熱原。

LumiMAT

LumiMAT™使用單核細胞系NOMO-1，其引入熒光素酶報告基因，通過表達熒光素酶蛋白以響應因暴露于熱原而激活的 NF-kB信號。當熱原與Toll-like Receptor（TLR）結合后，NF-κB信號會被激活，從而表達熒光素酶蛋白。當向其加入發光底物后，會發生發光反應，可通過檢測發光強度檢測熱原。

LumiMAT™的特點

◆檢測步驟

進行檢測時，需要LumiMAT™ Pyrogen Detection Kit – Cells（產品編號：298-36991）和LumiMAT™ Pyrogen Detection Kit – Reagent Set（產品編號：297-96801）一同使用。

向96孔板中添加待測樣品或內毒素標準品，添加報告細胞后孵育3 h。然后添加發光底物，使用酶標儀檢測發光強度。與傳統的ELISA法檢測相比，LumiMAT™在同一個平板中進行檢測，可減少實驗差異。此外，傳統方法需要1.5 天，而LumiMAT™僅需5 h左右即可得到檢測結果。

標準曲線范圍

RLU：Relative Light Unit（相對光強度）

EU：Endotoxin Unit（內毒素單位）

使用內毒素標準品制作標準曲線，以Endotoxin Equivalents（EE)/mL計算熱原含量。

標準曲線范圍：0.0125～0.8 EE/mL

◆檢測數據

再現性

使用3個批次的LumiMAT™，檢測準確率和精確度（n=4，各批次分別檢測3次）。添加6個濃度的內毒素標準品（USP-RSE），根據標準曲線計算濃度（EU/mL）。

已確認所有批次的準確率（檢測值/標準值）都在±10%以內，精確度都在CV20%以下，具有高再現性。

對非內毒素熱原（NEP，Non-Endotoxin Pyrogen）的反應性

向各Toll-like receptor (TLR)中添加不同濃度的非內毒素熱原（NEP），根據標準曲線計算每種NEP的濃度（EE/mL）?？v軸：EE/mL，橫軸：添加的NEP濃度

已確認不同濃度的NEP均可檢測。

◆加標回收測試

1.使用市售藥品進行加標回收測試

向各種藥品中添加內毒素標準品，計算回收率。

*MVD : 最大有效稀釋倍數（Maximum Valid Dilution）

**無干擾的標準: 50 < 回收率(%) < 200

在MVD范圍的稀釋倍率內，所有藥品的回收率均在50~200%的范圍內。

2.使用藥品原料進行加標回收測試

適用于各種樣品的檢測。

LumiMAT™采用NanoLuc®技術。NanoLuc® 技術由Promega Corporation授權。授權專-利：美國專-利第8557970號、美國專-利第8669103號以及與美國專-利第8557970號、美國專-利第8669103號享有同等優先權的所有專-利及申請中的專-利。NanoLuc® 為Promega Corporation的注冊商標。

◆產品列表