Biolife CS10細胞凍存液

美國Biolife品牌CryoStor臨床級即用型凍存液產品都預先配制了USP級DMSO，這是一種滲透性冷凍保護劑，有助于減輕冰的形成造成的損害。在廣泛的細胞類型中，CryoStor配方已被證明比商業和家庭釀造的等滲和細胞外配方更有效地減少保存后的凋亡和壞死。CryoStor產品符合 USP<71>無菌和 USP<85>內毒素檢測標準，并按cGMP生產。CryoStor CS10預先配制了10%的DMSO，在冷凍、儲存和解凍過程中為需要10% DMSO的細胞和組織提供了安全、保護的環境。通過調節對低溫保存過程的分子生物學反應，CryoStor提供了增強的細胞活力和功能，同時消除了血清、蛋白質或高水平的細胞毒性制劑的需求。

產品特點:

• 單獨的Biolife品牌標簽

• 預配置（10%DMSO）

• 無血清

• 無蛋白

• USP級別/高質量組分

• cGMP 制造

• FDA 藥物主文件備案

• 無菌、內毒素,以及細胞放行測試

產品規格:

產品參數：

Jurkat T細胞微球懸浮在的低溫培養基中，然后放置在2 ml 凍存管中，并在2-8℃下孵育15分鐘。然后將cryovials轉移到無LN2-程序降溫儀以-1℃/分鐘的速度冷凍保存。在達到-70℃后，將樣品轉移到LN2儲存至少24小時。樣品在條件下解凍，用CGM(1:10稀釋)重懸，在37℃和5% CO2下轉移到培養箱。在NucleoCounter NC-3000成像細胞儀(ChemoMetec，丹麥)上使用Via-1盒，根據膜完整性評估立即和解凍后24小時內的細胞存活率和計數。

圖1-Jurkat T細胞的活力是基于在解凍后24小時內使用膜完整性測定進行評估。

圖2-使用膜完整性試驗評估了解凍后Jurkat T細胞的可見復蘇率和擴增性能。

結論：

1-解凍后立即對細胞活率和數量進行分析并不能反映冷凍保存過程成功與否。未優化的冷凍培養基的不良影響可能要到解凍后的24-48小時才能檢測到，這歸因于低溫保存誘導的延遲性細胞死亡(DOCD)。另一方面，優化的低溫保存介質的加入可以防止DOCD的發生;因此，減少了變異性，更準確地估計了解凍后的生存和增殖。

2-低溫貯藏前的補料時間和培養基的變化對低溫貯藏過程的結果有重要影響。這可能是由于一些參數，包括在冷凍前活力試驗中沒有出現的壓力積累，但與DOCS結合，導致解凍后活力和功能的顯著損失。

3-冰成核的隨機性本質上導致了細胞在低溫保存過程中所承受的低溫保存誘導應力的變化。因此適當的成核對模型T細胞的生存能力和增殖能力有顯著影響。

4-在37°C介質中稀釋(類似于患者給藥情景)是解凍后的最佳稀釋實踐。強烈建議，為了分析目的，細胞也應在溫暖介質中稀釋，以盡量減少在洗滌過程中滲透細胞的腫脹和溶解。

使用方法：

1. 將待冷凍保存的細胞重懸置于懸浮液中(機械或酶法解離)

2. 對細胞進行離心

3. 去除上清液-注意:盡可能多地去除培養基，以減少冷凍液的稀釋。

4. 添加冷(2°-8°C) 的cryostor凍存液。細胞濃度按照常規細胞培養方案0.5-10*106細胞/mL(可能更高)。DMSO是預先混合在cryostor凍存液中且凍存液中不含添加劑。

5-預冷凍:細胞懸液在2°-8°C下孵育約10分鐘。

6-冷凍成核:在-80°C冷凍樣品(許多protocol推薦交替使用-70°C和-80°C環境來處理樣本)。對大多數哺乳動物細胞系統推薦使用程序降溫儀來控制速率冷凍(-1°C/min)，如果使用冷凍裝置或異丙醇容器則應提前容器預冷至2°-8°c，使用異丙醇容器的冷凍時間(-80°C)建議約為4小時，或不超過一夜。樣品內的冰成核應在大約-5°C下開始，使用可控速率冷凍機上的液氮爆裂程序設置，或在大約15-20分鐘后對冷凍液/樣品容器進行機械攪拌(輕彈或輕敲)。

7.儲存:將樣品放入儲存室，在液氮溫度下(低于-130°C)儲存樣品。樣品儲存在-80°C僅建議短期儲存(數周至數月)。

8.解凍:在37°C水浴或同類似的機械解凍裝置中快速解凍樣品，樣品融化時應輕輕地旋轉樣品，直到所有可見的冰都融化。在冰凍箱中，1ml樣品的大約解凍時間為2-3分鐘。不允許樣品在冷凍溫度(0-10°C)以上加熱。冷凍瓶從浴液中取出時，摸起來應該是涼的。不建議被動解凍。

9.立即用培養基或等效等滲介質稀釋細胞/冷凍液混合物。稀釋程序可以在一個步驟中完成。稀釋介質應在20°C至37°C之間。建議稀釋比為1:10(樣品與介質)或更大。

10. 應用合適的配置下種細胞。

11.將細胞放入培養條件或立即使用。

12.解凍后進行24小時生存能力評估。

注:為了獲得低溫保存后細胞活力的準確測量，應在解凍后24小時進行評估，并與非冷凍對照樣本進行比較。

*樣品解凍后立即使用膜完整性指標(如臺盼藍)進行評估，以比較分析樣品細胞產量和存活率，這往往導致對細胞存活率的測量不準確。

建議采用活/死熒光分析或代謝分析(MTT或alamarBlue*)更準確地評估可行回收率。

CryoStor產品在環境溫度下運輸。收到后，保存在2°-8°C，避光，直到準備使用