雷斯頓埃博拉病毒PCR檢測試劑盒
- 公司名稱 上海研生實業有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產地 國產
- 廠商性質 經銷商
- 更新時間 2023/3/20 10:17:12
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供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50T |
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應用領域 | 化工 | 主要用途 | 用于科學實驗 |
英文名稱 | Reston Ebola Virus PCR | 儲存條件 | -20℃避光保存,避免反復凍融 |
分類 | PCR檢測試劑盒 |
特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
產品名稱 | 英文名稱 | 規格 |
雷斯頓埃博拉病毒PCR檢測試劑盒 | Reston Ebola Virus PCR | 50T |
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
定量PCR方法:
熒光定量PCR探針法 | 熒光定量PCR SYBR Green染料法 | 快速PCR | 多重 PCR |
探針法即除了引物外另外設置一個探針,在探針的兩端分別帶上發光集團和淬滅集團,這個時候,兩個平衡不發光,但是當DNA通過引物合成的時候,探針被折斷,釋放出發光集團和淬滅集團,兩個距離較遠,發光集團產生熒光,被機器收集到信號,從而檢測基因的量 | 染料能夠與雙鏈結合,當PCR擴增的時候,染料結合到DNA上,從而發光,單個的染料不發光,這樣就能收集到信號,我們可以看出,染料法特異性不強,只要是雙鏈的DNA都回結合發光。 | 在快速PCR中,通過縮減PCR步驟所需時間來完成更快的擴增,且不會影響擴增產量和效率。快速循環條件尤其適用于具有高擴增能力的DNA聚合酶,這類聚合酶在每個結合中可引入更多的核苷酸。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時間的1/2至1/3,卻能維持較高的擴增效率。此外,如果引物的退火和延伸溫度相差無幾,則可將它們合并為一步,以進一步縮短PCR時間。這一過程也被稱為 兩步PCR法。 | 多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時檢測或鑒定和病原微生物,某些遺傳病及癌基因的分型鑒定。多種病原微生物的同時檢測或鑒定,是在同一PCR反應管中同時加上多種病原微生物的特異性引物,進行PCR擴增.可用于同時檢測多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染。 |
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PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度
Syntenin 2: 多配體聚糖結合蛋白2抗體 0.2ml
PHC1: 早期發育調控蛋白1抗體 0.2ml
增殖細胞核抗原抗體 Anti-PCNA 0.1ml
Anti-SRG5/SPATA12/FITC 熒光素標記發生相關基因5抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-NF1(Ser2515) 0酸化1型神經纖維瘤抗體 規格 0.1ml
fgL2 (Fibrinogen-like 2) 原酶 (又稱:纖維介素蛋白;前凝血素)Multi-class antibodies規格: 0.5mg
小鼠Ⅶ(FⅦ)ELISA試劑盒 ,英文名: FⅦ ELISA Kit
小鼠血小板活化因子(PAF)ELISA檢測試劑盒Mouseplateletactivatingfactor,PAFELISAKIT 96T/48T
人肥胖抑制素(Obestatin)免疫試劑盒 Human Obestatin ELISA kit
Ratlipoprotein-associatedphospholipaseA2,Lp-PL-A2ELISAKit大鼠脂蛋脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA試劑盒規格:96T/48T
Cy5標記二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微升
MouseNeuroophin4,-4ELISA試劑盒小鼠神經營養因子4(-4)ELISA試劑盒規格:96T/48T
雷斯頓埃博拉病毒PCR檢測試劑盒tau human 人微管相關蛋白Multi-class antibodies規格: 48T
Anti-CXorf36 脫羧酶蛋白體36抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh NGB/neuroglobin 腦紅蛋白/神紅蛋白/神經球蛋白抗體 規格 0.1ml
Human ankyrin B,Ank-B ELISA Kit 人錨蛋白B 96T
Thrombomodulin 英文名稱: 血栓調節蛋白抗體 0.1ml
Phospho-CHK2 (Ser33 + Ser35) 英文名稱: 0酸化細胞周期檢測點2抗體 0.1ml
Anti-CXorf36 脫羧酶蛋白體36抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml
使用方法
一、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。
8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照。