重組腺病毒在研究和治療應用中具有巨大的潛力。  

使用腺病毒將遺傳物質引入宿主細胞具有諸多優勢。其允許的宿主細胞范圍非常廣泛。該病毒已被用于感染許多哺乳動物細胞類型（包括增殖性和非增殖性細胞），以實現重組蛋白的高效表達。重組腺病毒尤其適用于那些通過脂質體轉染效率較低的細胞系中的基因轉移和蛋白表達。病毒進入細胞后，保持染色體外狀態（即不整合到宿主染色體中，因此不會激活或失活宿主基因）。最近，重組腺病毒已被用于將RNAi導入細胞。  

HEK 293細胞或其變體被用作病毒擴增的宿主細胞。重組腺病毒可以在高滴度下生長（101?病毒顆粒/mL，可濃縮至1013病毒顆粒/mL）。濃縮后的病毒上清液通過CsCl超速離心，將病毒與細胞蛋白和培養基成分分離。超速離心后，通過透析去除CsCl。CsCl程序既繁瑣又耗時（16-24小時）。  

艾美捷ViraBind腺病毒微量純化試劑盒不涉及超速離心，而是基于腺病毒衣殼蛋白的d特性質，通過離心柱捕獲病毒。整個過程大約需要30分鐘。每個離心柱設計用于從一個T75培養瓶或10厘米培養皿中收獲的病毒進行純化，容量可達1.0×1011病毒顆粒。  

ViraBind 腺病毒小量純化試劑盒提供了一個高效的系統，用于快速純化腺病毒，回收率超過95%。

ViraBind腺病毒微量純化試劑盒相關產品：  

1. AD-100：293AD細胞系  

2. AD-200：ViraDuctin 腺病毒轉導試劑，10次轉導  

3. VPK-109：QuickTiter 腺病毒滴度免疫測定試劑盒  

4. VPK-111：快速RCA測定試劑盒  

5. VPK-252：RAPAd® CMV腺病毒表達系統    

ViraBind腺病毒微量純化試劑盒（#VPK-099）組成：  

1. ViraBind 離心柱和收集管（部件編號40991）：10個迷你離心柱和20個收集管的包裝。  

2. 上樣緩沖液（部件編號40992）：一瓶10 mL。  

3. 洗滌緩沖液（部件編號40993）：一瓶20 mL。  

4. 洗脫緩沖液（部件編號40994）：一瓶10 mL，含25 mM Tris，pH 7.5，2.5 mM MgCl?，1 M NaCl。    

未提供材料：  

1. 感興趣的重組腺病毒  

2. HEK 293細胞及細胞培養生長培養基  

3. 細胞培養離心機  

4. 甘油  

5. 微量離心機  

儲存：將所有試劑盒組分儲存于室溫。

安全注意事項：請記住，您將處理含有感染性病毒的樣本。請遵循NIH推薦的針對BSL-2生物體的所有材料的指南。

感染細胞裂解液的收獲：  

以下程序適用于T75培養瓶，可根據個人需求進行優化。  

1. 使用HEK 293細胞，這些細胞應在感染前定期傳代2-3次。將這些細胞培養至單層細胞達到90-100%匯合。  

2. 用新的生長培養基替換細胞培養基，每瓶15 mL。然后將腺病毒加入培養物中。可以使用粗制或純化的病毒庫存。每細胞期望的感染復數（PFU，噬菌斑形成單位）為0.5到2。  

3. 24小時后，部分細胞應處于懸浮狀態。向培養瓶中加入10 mL生長培養基，并讓病毒再擴增24小時。當所有細胞都處于懸浮狀態時，輕輕搖晃培養瓶數次，并將所有培養基（包括細胞）收獲到無菌管中。  

4. 以1000 rpm離心5分鐘，沉淀細胞。將細胞沉淀重懸于0.8 mL培養基中，并通過三次凍融循環從細胞中釋放腺病毒。將上清液轉移到另一個微量離心管中，并丟棄細胞碎片。  

5. 以10,000 rpm離心10分鐘，進一步沉淀任何剩余的細胞碎片。丟棄沉淀，保存上清液。如果仍可見大量細胞碎片，再次離心上清液。  

注意：此步驟有助于防止在病毒純化步驟中離心柱堵塞。  

6. 病毒上清液可在-80°C下保存，或立即進行純化（見以下純化說明）。   

結果示例：  

以下圖表展示了典型的純化結果。以下數據僅供參考，不應用于解釋實際結果。

圖上：重組Ad-β Gal的純化。根據純化說明純化重組Ad-β Gal病毒。在純化過程中獲得的每個組分及其稀釋液用于感染12孔板中的A549細胞。48小時后，進行X-gal染色，并對β Gal陽性細胞（藍色）進行計分。

圖下：由激活的H-Ras誘導的膜褶皺。COS-7細胞以50 MOI（感染復數）的感染量被純化的Ad-β Gal或Ras G12V感染。感染48小時后進行X-gal染色。通過用羅丹明偶聯的鬼筆環肽染色肌動蛋白細胞骨架，可視化膜褶皺。

ViraBind腺病毒微量純化試劑盒文獻參考：

1. Stewart, P. L., Fuller, S. D., and Burnett, R. M. (1993) EMBO J. 12, 2589-2599.

2. Robbins, P. D., Tahara, H., and Ghivizzani, S. C. (1998) Trends Biotechnol. 16, 35-40.

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4. Bergelson, J. M., J. A. Cunningham, G. Droguett, E. A. Kurt-Jones, A. Krithivas, J. S. Hong, M. S.

Horwitz, R. L. Crowell, and R. W. Finberg. (1997) Science 275:1320-1323.

5. Von Seggern, D. J., C. Y. Chiu, S. K. Fleck, P. L. Stewart, and G. R. Nemerow. (1999) J. Virol.

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6. Kleinerman, D. I., W. W. Zhang, S. H. Lin, N. T. Van, A. C. von Eschenbach, and J. T. Hsieh.

(1995) Cancer Res. 55:2831-2836.