一、無(wú)血清細(xì)胞凍存技術(shù)演進(jìn)里程碑
1980s:胎牛血清(FBS)依賴時(shí)代(存活率<50%)
2005:First商品化無(wú)血清凍存液(HSA替代方案)
2020:重組蛋白替代血清(ISO13485認(rèn)證)
二、無(wú)血清細(xì)胞凍存核心配方組分
組分類型 | 作用機(jī)理 | 典型濃度 |
滲透壓調(diào)節(jié) | 海藻糖/蔗糖(玻璃化轉(zhuǎn)變保護(hù)) | 50-100mM |
膜穩(wěn)定劑 | 羥yi基淀粉(抑制冰晶生長(zhǎng)) | 5% w/v |
抗氧化系統(tǒng) | 谷胱甘肽+二氫硫辛酸 | 1-3mM |
非蛋白保護(hù)劑 | 泊洛沙姆188(機(jī)械應(yīng)力緩沖) | 0.01% |
三、無(wú)血清細(xì)胞凍存關(guān)鍵性能參數(shù)
細(xì)胞類型凍存效率評(píng)估COS-7細(xì)胞>95%存活hMSC復(fù)蘇分化率維持92%雜交瘤細(xì)胞抗體產(chǎn)量無(wú)衰減
注:-196℃液氮存放5年后數(shù)據(jù)
四、無(wú)血清細(xì)胞凍存方案優(yōu)化指南
程序降溫曲線
第一階段:4℃ → -4℃(-1℃/min)
臨界區(qū):-4℃ → -40℃(-10℃/min)
終段:-40℃ → -80℃(自由降溫)
復(fù)蘇關(guān)鍵步驟
水浴溫度嚴(yán)格控制在37±0.5℃
融化速度>100℃/min(推薦使用金屬浴)
FIRST培養(yǎng)基添加5mM NAC(N-乙酰半胱氨酸)
五、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)體系
檢測(cè)項(xiàng)目 | 方法 | 合格標(biāo)準(zhǔn) |
無(wú)菌性 | 薄膜過(guò)濾法 | 14天培養(yǎng)無(wú)微生物生長(zhǎng) |
內(nèi)毒素 | 鱟試劑動(dòng)態(tài)顯色法 | <0.5EU/mL |
滲透壓 | 冰點(diǎn)滲透壓計(jì) | 280-320mOsm/kg |
六、臨床應(yīng)用突破
CAR-T細(xì)胞治療:凍存復(fù)蘇后CD3+細(xì)胞占比>85%(傳統(tǒng)方案<70%)
干細(xì)胞庫(kù)建設(shè):5年存儲(chǔ)成本降低40%(無(wú)需血清批次驗(yàn)證)
器官應(yīng)用:肝細(xì)胞冷凍存活率從68%提升至91%
?? 使用注意
避免反復(fù)凍融(凍存液玻璃態(tài)最多耐受3次溫度波動(dòng))
神經(jīng)細(xì)胞建議添加5μM Y-27632(ROCK抑制劑)
凍存管選擇1.8mL內(nèi)螺旋口(保證-150℃密封性)
amsbio無(wú)血清型細(xì)胞凍存液、Wako BAMBANKER無(wú)血清細(xì)胞凍存液——天津益元利康生物科技有限公司
成立于2018年,坐落于天津經(jīng)濟(jì)技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)。公司產(chǎn)品線涉及細(xì)胞與基因治療、免疫學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等多個(gè)方向,專注于生命科學(xué)試劑、耗材、細(xì)胞、儀器等產(chǎn)品銷售,經(jīng)營(yíng)的品牌主要有:ThermoFisher、Sigma、Qiagen、EZBioscience、ZYMO Research、MedKoo、Abcam、BioLegend等等。我們提供質(zhì)優(yōu)價(jià)美的產(chǎn)品、及時(shí)到位的服務(wù),努力成長(zhǎng)為生命科學(xué)和生物技術(shù)企業(yè)的優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商。
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