ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定 ( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱,是一種檢測方法,標準品是相對于具體的物質有具體的標準品。ELISA標準曲線是結果計算的尺子,標準品是ELISA 實驗成功與否的關鍵點。ELISA 實驗標準品溶解稀釋流程:
1、粉末標準品短暫離心,讓因運輸沾到管蓋、管壁的標準品沉到管底。
2、根據瓶標簽加入一定體積的蒸餾水,加水后輕柔渦旋震蕩,室溫靜置溶解 10-30min,讓粉末全溶解。
注意:加水后暫不用移液槍吹吸,避免蛋白未溶解,槍頭帶出部分蛋白,待全溶解后可吹吸或渦旋振蕩混勻。
3、標準品梯度稀釋:
(1)標準品稀釋液的選擇:
若血清、血漿、組織勻漿樣本,用試劑盒中的標準品稀釋液,梯度稀釋標準品。若細胞上清樣本,建議用細胞培養基梯度稀釋標準品。
(2)耗材準備:
準備8個1.5Ml離心管,寫上S1-S7、空白。
(3)梯度稀釋:
根據說明書,每管加入等體積的標準品稀釋液(培養基)。吸取同體積溶解好的標準品到S1管中,吹打10次混勻,渦旋5S。從S1管中吸取同體積溶液到 S2管,吹打10次混勻,渦旋5s。同法稀釋S3-S7濃度。
(4)空白:
標準品稀釋液(培養基)作為空白即零濃度。注意:梯度稀釋標準品時,渦旋震蕩混勻后可短暫離心,讓到蓋子、壁上的液體到管底,再開始稀釋下個濃度。
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