【Biorbyt內參專題】細胞器標志物

原創 biorbyt 英國biorbyt 

細胞的生命活動依賴于其“細胞器”有條不紊地發揮各自的功能，不同細胞形態各異，細胞器組成上有一定的差異，但是主要細胞器組成單元是一樣的。

在Western Blotting中使用內參，就是在WB過程中另外用內參對應的抗體檢測內參，這樣在檢測目的產物的同時可以檢測內參的表達。由于內參在各組織和細胞中的表達相對恒定，借助檢測每個樣品內參的量就可以用于校正上樣誤差，這樣半定量的結果才更為可信。此外使用內參可以作為空白對照，檢測蛋白轉膜情況是否*全、整個Western Blot顯色或者發光體系是否正常。

在Western Blotting實驗過程中，使用內參的方法通常有以下三種：

1，是超級簡便的標記內參使用法，只要在二抗孵育時加入HRP標記內參抗體，按照正常操作即可。

2，普通內參，當目的蛋白的分子量大小與選用的內參蛋白分子量相差不大時，可以*進行目的蛋白的抗體溫育顯色和檢測，然后使用Strip緩沖液洗掉膜上的抗體，重新進行內參蛋白的抗體溫育、顯色檢測。

3，當目的蛋白的分子量大小與選用的內參蛋白分子量大小相差比較明顯情況下，可以在轉膜后預染，根據蛋白質Marker的大小將膜剪為大分子量和小分子量兩部分，使內參蛋白與目的蛋白分開，然后兩塊膜分別與內參蛋白抗體和目的蛋白抗體進行溫育，二抗溫育以及顯色。一般我們選擇內參與要檢測的目的蛋白的分子量*好相差5KD以上。因此要根據檢測的蛋白的分子量來選擇合適的內參!