隨著癌癥治療領域的不斷創新，免疫細胞療法（Immune Cell Therapy）逐漸成為一種備受關注的治療方法，旨在通過激活或增強患者自身的免疫系統來對抗癌癥。這類療法的核心思想是利用免疫細胞的天然殺傷功能，增強其對癌細胞的識別和清除能力。免疫細胞療法有多種形式，常見的包括細胞因子誘導的殺傷細胞療法、T細胞療法、CAR-T細胞療法（嵌合抗原受體T細胞療法）、CAR-NK細胞療法（嵌合抗原受體自然殺傷細胞療法）等。

其中，CAR-T（Chimeric AntigenReceptor T-Cell immunotherapy）細胞療法是一種通過將患者的T細胞重新編程，使其表達針對特定腫瘤抗原的嵌合抗原受體（CAR），從而增強T細胞對腫瘤細胞的靶向識別和攻擊能力的治療方法。這種療法已在多種血液腫瘤（如急性淋巴細胞白血病、非霍奇金淋巴瘤等）中取得了顯著療效。

Keywords: CAR-T; Lentiviral; Lentiviral Vector；Tracer Lentivirus

一、CAR-T細胞療法的制備

一般來說，制備CAR-T細胞的過程可分為以下幾個關鍵步驟：

圖片來源：Dana-Farber Cancer Institute-CAR T-細胞臨床試驗幫助多發性骨髓瘤患者恢復健康

分選（T細胞分離）

制備CAR-T細胞的第一步是從患者的外周血中的白血細胞分離出T細胞。通常采用免疫磁珠分選法或流式細胞術等技術，從血液中提取出富含CD3+的T細胞。為了確保細胞的純度，分選過程需要十分精細，確保得到足夠數量的高質量T細胞。

激動（T細胞激活）

提取出的T細胞在體外需要進行激活，通常采用CD3/CD28活化擴增試劑盒（CD3/CD28 T Cells Activation /Expansion Kit）來激活T細胞。激活后的T細胞會進入活躍狀態，準備進行基因轉染。通過這一過程，T細胞的功能得到增強，有助于后續的基因改造和擴增。

轉染（基因編輯）

激活后的T細胞將接受基因轉染，以使其表達嵌合抗原受體（CAR）。這一過程通常使用慢病毒載體（Lentiviral vector）將CAR基因導入到T細胞中。慢病毒是一種有效的基因轉導工具，其優點在于能夠穩定地將目標基因（如CAR基因）整合入細胞基因組中。慢病毒通過感染T細胞并將CAR基因轉染進T細胞的DNA中，使T細胞能夠長期表達CAR。CAR基因包括一個抗體的單鏈可變片段（scFv），使T細胞能夠識別腫瘤細胞表面的特定抗原，并通過激活T細胞的信號傳導區域來啟動免疫反應。如圖2所示。慢病毒轉染具有高效、穩定的特點，使得CAR基因能夠在T細胞中長期表達。

圖片來源：Singapore CAR-T細胞療法

擴增（細胞增殖）

轉染后的CAR-T細胞將進入擴增階段，通過添加IL-2等生長因子促進細胞增殖。此過程的目的是確保在最終注入患者體內時，能夠提供足夠數量的CAR-T細胞。擴增過程需在無菌的條件下進行，保證細胞的質量與數量。

質控（質量控制）

在回輸患者前。在制備過程中，質量控制環節至關重要。制備出來的CAR-T細胞需進行嚴格的檢測，以確保細胞的純度、活性、轉染效率等符合治療標準。此外，還需要檢測是否存在細胞污染或不良反應，以確保細胞回輸入原患者體后的安全性和治療效果。

二、慢病毒轉染免疫細胞中的重要性

在免疫細胞療法中，慢病毒轉染技術起到了至關重要的作用，尤其在基因編輯和細胞工程化的關鍵環節。慢病毒載體的優勢，使其成為當前免疫細胞療法中最-廣泛使用的基因轉導工具。

慢病毒（Lentivirus）是一類能夠感染人類及其他哺乳動物細胞的病毒類型，它來源于HIV-1，經過安全改造后成為了研究人員轉導目標基因的完-美工具。它隸屬于逆轉錄病毒科， 逆轉錄病毒的特點是它們攜帶RNA基因組，并通過一種名為“逆轉錄酶”的蛋白將RNA轉錄成DNA，然后通過整合酶將DNA整合到宿主細胞的基因組中。由于慢病毒能把自身序列整合到宿主基因組，使得基因能長期穩定表達，并且能夠感染分裂和非分裂的細胞。科研人員基于慢病毒這些特征，通過對慢病毒進行了安全性改造，慢病毒的基因被分散在了三個質粒，包裝質粒（提供病毒的核心結構蛋白gag和反轉錄酶pol），包膜質粒（提供包膜糖蛋白VSV-G用于穿透細胞膜），以及帶有目標基因的穿梭質粒。科學家們還敲除了HIV-1的vif、vpr、vpu和nef基因， 以及在穿梭質粒中3’LTR的U3序列，使HIV-1失去復制能力。使其無法在產生新的病毒顆粒，同時使用水泡性口炎病毒糖蛋白（VSV-G）替代了在包膜質粒中的env編碼的包膜糖蛋白來擴大慢病毒感染細胞的類型。在減少了生物安全風險后，已經被用作基因導入哺乳動物細胞的載體，由于其具有高效、持久表達的特點，廣泛應用于基因治療、基因編輯和細胞生物學研究等領域。

圖片來源：product/ 慢病毒包裝以及慢病毒轉染293T細胞過程示意圖

【高效的基因轉導能力】

慢病毒載體（Lentiviral vector）能有效地將目標基因（如CAR基因）轉入免疫細胞中，并能夠將基因穩定整合到細胞基因組中，使得CAR基因能夠在細胞分裂和增殖過程中持續表達。這種高效的轉染能力是確保免疫細胞療法成功的基礎。

【較低的免疫原性】

與其他病毒載體相比，慢病毒的免疫原性較低，因此使用慢病毒轉染免疫細胞時，患者的免疫系統對病毒的免疫反應相對較弱。這有助于減少不良反應，尤其是在細胞回輸后的長期生存中，避免了過度的免疫排斥反應。

【對免疫細胞的高適應性】

慢病毒載體（Lentiviral vector）能夠有效轉染多種類型的免疫細胞，尤其適用于T細胞和NK細胞等。通過慢病毒的轉染，免疫細胞可以獲得針對腫瘤的特異性識別能力，從而增強其殺傷腫瘤的能力。

【轉染效應細胞對靶細胞的精準性】

在免疫細胞療法中，轉染效應細胞是指那些通過轉染后能夠表達CAR并發揮抗腫瘤作用的免疫細胞。慢病毒能夠精準地將CAR基因轉入這些效應細胞，使其能夠識別并攻擊腫瘤靶細胞。靶細胞是指被這些免疫細胞識別并殺傷的腫瘤細胞。通過慢病毒轉染，免疫細胞可以增強對腫瘤細胞的特異性識別和殺傷能力，從而提高治療效果。

鑒于此，IPHASE作為體外研究生物試劑引-領者，為縮短免疫細胞療法客戶轉染的復雜性和提高基因穩定轉染的成功性，開發了慢病毒包裝試劑盒（Lentivirus Packaging Kit）及慢病毒濃縮液（Lentivirus Concentration Reagent），為客戶提供一站式解決方案！

三、IPHASE慢病毒產品

IPHASE慢病毒包裝試劑盒（IPHASE Lentivirus Packaging Kit）包含了進行慢病毒包裝（Lentivirus Packaging）所需的全部核心試劑，極大簡化了實驗流程，節省了時間和精力。此試劑盒包括：

· Lentivirus Packaging Plasmid Mix

· Transfect Reagent

· eGFP Plasmid

· IPHASE Lentivirus Concentration Reagent

該試劑盒真正實現了精簡試驗！無需繁瑣的試劑準備，僅需對照說明書便可高效完成慢病毒包裝。試劑盒的獨-特優勢在于：包裝時間短、病毒濃度高、操作簡便，非常適合慢病毒包裝的初學者使用。每一組試劑都經過嚴格質量檢測，確保實驗結果準確、可靠、重現性強，從而顯著提高轉染效率和病毒載體的穩定性，為您的免疫細胞制備提供強有力的技術支持。

此外，為節省客戶成本，IPHASE同時開發、生產了慢病毒濃縮液（Lentivirus Concentration Reagent），為廣大客戶提供了一種快捷、簡便的濃縮解決方案。只需將慢病毒上清液與濃縮試劑混合，進行簡單的孵育步驟，再通過標準離心機離心，即可快速富集慢病毒顆粒。無須超速離心機，這對大多數實驗室用戶來說，是一個便捷且經濟的選擇。

· 濃縮快速：濃縮過程僅需1小時即可完成。

· 提升滴度：該試劑能夠將病毒載體滴度提高10-100倍，同時減少材料損失，確保您獲得高效的病毒載體。

· 簡便易操作：操作簡單，無需復雜設備和長時間孵育，極大提升工作效率。

簡而言之，IPHASE慢病毒濃縮液（Lentivirus Concentration Reagent）不僅能顯著提高轉染效率，還能為免疫細胞制備提供高質量的病毒載體支持，是日常實驗、臨床前研究及其他應用領域不-可或-缺的優異產品！

綜上所述，免疫細胞療法，特別是CAR-T細胞和CAR-NK細胞療法，代表了現代腫瘤治療的新方向。通過精細的細胞分選、激活、轉染、擴增和質控等工藝，科學家能夠為患者制備出高效、安全的免疫細胞產品，從而實現對腫瘤的精準治療。而慢病毒轉染作為其中的核心技術，因其高效、穩定的特性，在CAR-T和CAR-NK細胞的制備過程中起到了至關重要的作用。隨著技術的不斷進步，免疫細胞療法有望為更多患者提供全新的治療選擇，帶來更大的臨床價值。隨著技術的不斷進步，免疫細胞療法在未來有望為更多癌癥患者帶來革命性的治療希望。

與此同時，IPHASE為滿足基因轉導、基因表達和疾病研究等多個領域客戶的需求，不僅提供慢病毒包裝試劑盒和慢病毒濃縮液，還在客戶不同需求的基礎上分別使用綠色熒光蛋白（Green fluorescent protein， GFP）、紅色熒光蛋白mCherry和Luciferase熒光素酶對Lentivirus進行包裝，形成示蹤病毒（Tracer Lentivirus），方便客戶對目標細胞進行體外和/或體內的位置追蹤，確定目標細胞靶向性！

GFP是從水母 Aequorea victoria 中提取的天然蛋白質，能夠在紫外光或藍光的激發下發出明亮的綠色熒光，被廣泛用于細胞標記和追蹤。通過將GFP基因包裝到Lentivirus中，研究人員能夠轉導GFP進入體外實驗中的目標細胞基因，實時監測目標細胞，并通過熒光顯微鏡進行可視化分析。mCherry是一種紅色熒光蛋白，廣泛應用于雙標記實驗中，尤其在與GFP聯合使用時。mCherry的發射波長較長，在紅光激發下能夠發出明亮的紅色熒光。這使得它成為了與GFP等其他熒光標記物配合使用的理想選擇。研究人員可通過同時使用GFP和mCherry示蹤病毒來轉導不同的細胞，研究人員可以在同一實驗中觀察不同細胞的行為，為復雜的生物過程提供更多的可視化信息。因此，GFP和mCherry均為體外進行目標細胞實時追蹤監測的有效熒光蛋白！

而Luciferase是一種能催化熒光素底物發光的酶，廣泛應用于細胞和動物模型中的基因表達檢測和動態監測。Luciferase的優勢在于，它不依賴于外源熒光染料，而是通過底物（熒光素D-Luciferin）和Luciferase產生反應來產生可被檢測的光信號，Luciferase的發光信號具有高靈敏度和較長的發光時間。Luciferase常用于體內實驗中，尤其是用于監測腫瘤生長、藥物反應、感染過程等動態生物學研究。

鑒于此，IPHASE為滿足不同客戶體外和/或體內試驗對于目標細胞追蹤的要求，在此基礎上，開發了GFP和Luciferase及mCherry和Luciferase兩款已包裝好的示蹤用病毒，客戶可根據試驗需求分別選擇示蹤病毒，也可搭配使用，省時省力，提高效率，是實時追蹤監測目標細胞動態的又一大利器！

四、IPHASE免疫療法相關產品

除了應用于CAR-T或CAR-NK等的慢病毒相關產品外，IPHASE作為體外研究生物試劑引-領者，在支持CGT創新療法等其它領域也不遺余力，開發生產了經白細胞單采術分離的白細胞和PBMC及多種免疫細胞分離試劑盒，助力免疫細胞療法蓬勃發展！

IPHASE產品均具有以下優勢，且每批次產品可為您出具IPHASE自行驗證的COA數據。

安全性

IPHASE提供產品的捐獻者/動物體均為健康供體，經過預篩選，且病毒檢測為陰性（HIV-1/2,HBV,HCV,梅毒）。

合規性

IPHASE提供捐獻者簽署的知情同意書，來源清晰可溯源。

專業性

IPHASE提供的經白細胞單采術所得的產品，均由專業人員操作執行，每個批次的產品均提供相應COA，且全程冷鏈運輸，安全、快速保證產品質量。

服務好

高質量的售后服務，確保試驗一路綠燈。

可定制

可根據客戶的特殊需求“專人專-供”。

IPHASE/匯智和源憑借多年的研發經驗，推出了多領域、多種類的高-端科研試劑，為藥物早期研發提供篩選工具，為生命科學領域的探索提供新材料、新方法和新手段，為食品、藥品、化學品等的遺傳毒性研究提供便捷產品，望廣大科研工作者咨詢。

發    文    章    得    獎    勵

凡使用本公司產品，在國內及國際刊物上發表論文（論文發表日起一年內），并注明產品屬于IPHASE BIOSCIENCES Co.,Ltd. / 匯智和源生物技術（蘇州）有限公司所有，即可申請獎勵。根據發表刊物影響因子不同，給予不同金額獎品：

非SCI論文及IF≤5分，500元禮品；

5分＜IF≤8分 800元禮品；

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IF≥10分 2000元禮品；

注：①禮品卡也可兌換同等金額產品購買抵用券；

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