?

終點PCR（End Point PCR）是一種傳統的PCR方法，其特點是在PCR反應完成后進行分析和檢測。通常，終點PCR用于定性分析，即判斷是否存在特定的目標序列。完成PCR反應后，需要通過凝膠電泳或其他分子生物學技術來驗證擴增是否成功，經常在檢測樣品中的特定DNA或致病基因等情況下使用。傳統瓊脂糖凝膠電泳技術中終點PCR的反應時長通常為1-2 小時，從制備瓊脂糖凝膠到獲得結果大約需要3 小時甚至更長時間。

島津微芯片電泳裝置MultiNA是一款可以全自動執行與瓊脂糖凝膠電泳相同分析的分析裝置。無需制備凝膠，只需將專用試劑盒和分析樣品裝入設備即可進行分析。使用島津微芯片電泳裝置MultiNA僅需10-15 分鐘即可以完成從試劑制備到樣本收集等的分析前準備工作。

應用案例

島津微芯片電泳裝置MultiNA的終點PCR高速分析

本文介紹采用Promega公司的GoTaq Rapid PCR Master Mix和Eppendorf公司的Mastercycler X50s Thermal cylcer擴增PCR產物，利用島津微芯片電泳裝置MultiNA進行的終點PCR分析。

1樣品配置及分析條件

PCR材料使用了50 ng的Human genomic DNA，PCR擴增目標是Human Beta-2-microglobin。試劑使用了Promega公司的GoTaq Rapid PCR Master Mix (圖1A) ，PCR反應中使用了Eppendorf公司的Mastercycler X50s Thermal cycler (圖1B) ，PCR的Cycling setting(表1)所示。PCR反應在n=3下進行。

2通過MultiNA測定PCR產物

利用島津微芯片電泳裝置MultiNA對PCR產物進行了分析。分析熒光色素使用SYBR Gold, MultiNA專用試劑盒和DNA-1000試劑盒 (表2) 。

3分析結果

通過微芯片電泳結果，我們能夠確認從Human genomic DNA靶向的HumanBeta-2-microglobin區域的擴增為200 bp, 600 bp, 1000 bp和更高的1400 bp (圖2) 。其中200 bp、600 bp和1000 bp,可以清楚地確認擴增DNA，1400 bp的擴增產物相比較少，主要可能是由于PCR擴增效率較低。但與瓊脂糖凝膠電泳+溴化乙錠染色相比，MultiNA的熒光檢測靈敏度高出一個數量級。因此我們也認為本次檢測成功地檢測出了1400 bp的擴增產物。

4總結

本次，通過使用Promega公司的GoTaq Rapid PCR Master Mix作為PCR的反應試劑，使用Eppendorf公司的Mastercycler X50s進行終點PCR, PCR的反應僅用了13 分鐘30 秒就完成。此外，PCR產物通過島津微芯片電泳裝置MultiNA進行全自動分析，無需制備凝膠。無論樣本數量多少，MultiNA在大約10 分鐘到15 分鐘內即可完成從試劑制備到樣本收集的分析前準備工作，并開始電泳，并且分析開始后，用戶只需等待結果無需人工操作。

通過結合使用GoTaq Rapid PCR Master Mix、Mastercycler X50s和島津微芯片電泳裝置MultiNA,可以大大縮短終點PCR所需的時間，并減少人工操作環節。

關聯儀器:島津微芯片電泳裝置MultiNA

①. 高速分析：最多108 個樣品的高速自動分析操作

②. 高靈敏度：靈敏度約高于使用溴化乙錠染色法電泳膠片的10 倍

③. 高分辨率：可以解決瓊脂糖凝膠電泳難以分離的碎片

④. 高重現性：通過內標的自動混合與共遷移，實現高重現性

⑤. 成本低廉：每次分析完成后，所有管線及微芯片自動清洗，微芯片可重復利用

本文內容非商業廣告，僅供專業人士參考。