活化就是將保藏狀態的菌種放入適宜的培養基中培養,逐級擴大培養得到純而壯的培養物,即獲得活力旺盛的、接種數量足夠的培養物菌種發酵有一般需要2-3代的復壯過程,因為保存時的條件往往和培養時的條件不相同,所以要活化,讓菌種逐漸適應培養環境。那么你知道細菌活化的操作流程是什么嗎?讓我們一起來看看吧!
1. 在無菌操作下,用無菌微量吸管,從已溶解的管中吸取50μL(或1-2滴)的菌液,滴入固態培養基(培養基編號及溫度示于菌株訂購單)某一邊緣附近,以劃線法接種于培養基。
2. 將接種好的培養基置于溫度的培養箱中培養。
3. 在無菌環境下,以沾有75%酒精的棉花擦拭外管,在火焰上加熱外管之尖端。滴數滴無菌水于加熱處,使外管破裂,再以硬棒敲破尖端。取出隔熱纖維紙和內管,以滅菌過的鑷子取出內管之棉塞。
4. (a)適用于細菌用無菌吸管,吸取0.3-0.5mL之液體培養基,滴入內管內,并輕微震蕩(可用該吸管協助),直到均勻懸浮。
(b)適用于霉菌、酵母菌用無菌吸管,吸取0.3-0.5mL無菌水,滴入內管內,待干燥粉末溶解后,以無菌吸管吸取并滴入約含有5ml無菌水之試管內,輕微震蕩使其均勻后,靜置30至60分鐘。
5. 取0.1-0.2mL之菌體懸浮液于平板培養基上,做劃線分離培養或做成一系列之稀釋,用無菌L型玻棒均勻涂抹,以檢驗菌種之純度及活化情形,而剩余的菌體則全部移入液體培養基內,并依溫度培養之。
6. 某些菌種經過冷凍干燥保存后,遲滯期(lagperiod)較長,必須等培養二倍時間后才能長出,且再經過一、二次繼代培養(Subculture)后才能正常生長。經過以上的努力后仍培養失敗,才視為不能活化。
7. 未開封之冷凍干燥管,請冷藏于4℃冰箱,切勿冷凍保存。
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