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水性C18色譜柱通用使用指南

來源:RESTEK 瑞思泰康科技(北京)有限公司   2024年06月20日 14:15  
水性C18色譜柱是一種專門設(shè)計(jì)用于在高水相流動(dòng)相條件下工作的反相高效液相色譜(HPLC)柱。它通常用于極性和親水性化合物的分離。以下是水性C18色譜柱的通用使用指南:  
1.色譜柱的安裝  
檢查與連接:在安裝前確保色譜柱處于良好狀態(tài),沒有損壞。使用適配器將色譜柱牢固地連接到HPLC系統(tǒng)中,確保無泄漏。  
沖洗:在初次使用或長時(shí)間不使用之后,應(yīng)使用純?nèi)軇ㄈ缂状蓟蛞译妫_洗色譜柱,通常以0.5-1.0mL/min的流速進(jìn)行15-30分鐘的沖洗。  
2.流動(dòng)相的選擇與制備  
高水相流動(dòng)相:由于這是水性C18色譜柱,應(yīng)使用高水相比例的流動(dòng)相,典型的是80%以上的水相。常用的水相包括純水、含有少量緩沖鹽的水溶液(如磷酸鹽緩沖液)。  
有機(jī)相助溶劑:常用的有機(jī)相助溶劑包括乙腈或甲醇。根據(jù)目標(biāo)化合物的極性,調(diào)整有機(jī)相比例。  
pH調(diào)節(jié):對于大多數(shù)分析物,流動(dòng)相的pH值應(yīng)該控制在色譜柱能夠承受的范圍內(nèi)(通常為2-8),并且應(yīng)盡量接近中性以保護(hù)色譜柱。  
3.樣品制備  
樣品溶劑:樣品應(yīng)溶解在流動(dòng)相中或與流動(dòng)相相似的溶劑中,以減少峰形變差和拖尾現(xiàn)象。  
過濾:樣品溶液應(yīng)通過0.22μm或0.45μm的濾膜過濾,以除去顆粒物,防止堵塞色譜柱。  
4.操作條件  
流速:一般建議在0.5-1.5mL/min的流速范圍內(nèi)操作,根據(jù)具體分析需求調(diào)整。  
柱溫:控制柱溫在20-40°C之間,具體溫度根據(jù)分離效果優(yōu)化。  
進(jìn)樣量:為避免柱超載,通常推薦進(jìn)樣量在1-20µL范圍內(nèi),根據(jù)樣品濃度和柱子尺寸調(diào)整。  
5.色譜柱的維護(hù)  
清洗:定期用高比例有機(jī)溶劑(如乙腈或甲醇)沖洗色譜柱,尤其是在連續(xù)使用后或更換流動(dòng)相前。  
儲(chǔ)存:短期存放時(shí),用流動(dòng)相進(jìn)行沖洗并保持濕潤。長期存放時(shí),建議用有機(jī)溶劑(如乙腈)沖洗后密封保存。  
再生:如果色譜柱性能下降,可以嘗試用梯度沖洗法再生色譜柱,從高水相到高有機(jī)相,再返回高水相,逐步?jīng)_洗。  
6.常見問題及處理  
柱壓升高:檢查流動(dòng)相和樣品是否有顆粒物,必要時(shí)更換過濾器或預(yù)柱。也可能需要用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱。  
峰形變差:檢查樣品溶劑與流動(dòng)相的匹配性,調(diào)整進(jìn)樣量;確保色譜柱沒有堵塞或老化。  
分離度下降:優(yōu)化流動(dòng)相比例、流速和柱溫,或考慮更換色譜柱。  
通過遵循以上指南,可以有效地使用和維護(hù)水性C18色譜柱,確保其最佳性能和長使用壽命。  
 

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