雙特異性抗體（Bispecific Antibodies, BsAbs）是一種新型的生物治療藥物，它們能夠同時結合兩種不同的抗原，在多種疾病治療，尤其是癌癥治療方面展現出巨大的潛力。然而，由于BsAbs的結構復雜性和作用機制的多樣性，為它們的生物活性檢測和表征帶來了挑戰。本文將探討BsAbs的生物活性檢測策略，并結合案例研究，提供對這一領域的深入見解。

BsAbs的結構多樣性與作用機制

BsAbs的設計和開發受益于對傳統單克隆抗體（mAbs）的深入了解。它們具有與常規mAb相似的表位特異性和可改造性，可以結合兩個不同的抗原位點。BsAbs的結構非常多樣化，取決于預期的作用機制（MoA）和所需的藥代動力學/藥效學（PK/PD）特性。BsAbs的作用機制大致可分為四類：細胞橋接型、受體/配體阻斷或激活型、輔助因子模擬型和“歸巢”型。

BsAbs生物活性檢測的挑戰與策略

開發BsAbs的生物活性檢測方法需要深入理解其分子的作用機制，以及全面了解不同生物分析方法的原理和應用。生物活性檢測對于生物制品的表征和控制至關重要，也是解釋臨床研究結果的關鍵。

1. 分階段檢測方法

對于生物治療藥物的生物活性檢測，行業和監管機構普遍接受分階段檢測的方法。在產品開發的早期階段，通常首-選結合方法進行檢測。隨著產品開發的推進，更復雜的、反映MoA的基于細胞的生物活性檢測方法被開發出來，并在上市申請提交前進行驗證。

2. 作用機制驅動的設計

生物活性檢測策略是由藥物預期的生理MoA驅動的。與其它分析技術不同，生物活性檢測針對每種治療藥物都是獨-一無二的。一個設計良好的生物活性檢測方法能夠準確捕捉藥物候選物的生物活性。

3. 整體BsAbs表征策略

BsAbs的效力和安全性評估依賴于成功開發一個藥理學和臨床相關生物分析策略，該策略能夠反映雙特異性抗體的生物活性，并能夠區分高級結構、效力和療效。其中重要的是開發表征和生物分析方法來研究重要的質量屬性，包括整體穩定性、片段化/聚集/免疫原性、抗原特異性、親和力、結合和解離速率、雙靶點結合的親和力（對于在同一細胞上的兩個靶點的分子）和MoA/生物活性。

BsAbs生物活性檢測案例研究

1. ELISA和SPR技術

ELISA和SPR技術常用于表征BsAbs的體外抗原結合特性。ELISA具有靈敏度高、開發速度快和成本相對較低等優點，而SPR能夠實時監測結合事件，提供動力學和熱力學參數。

2. 細胞表面配體結合檢測

通過流式細胞術和基于細胞的報告基因分析，可以評估BsAbs與其目標的結合特異性和選擇性，這些信息在傳統的SPR或ELISA基礎結合分析中無法捕獲。

3. 效力檢測

針對BsAbs的效力檢測策略具有挑戰性，因為其復雜的MoA涉及兩個靶點結合。效力檢測應該根據MoA進行定制，同時滿足QC和監管部門的要求，成為穩定和靈敏的方法，以檢測穩定性中的任何結構變化。

4. 效應功能檢測

一些BsAbs通過靶向細胞表面蛋白或受體來增強ADCC效應功能。根據MoA和其他分子特異性因素，效應功能可能與一些安全事件相關，因此，優選效應功能減弱的Fc區域。

結論

BsAbs是一個極-具前景的新興治療領域。由于BsAbs與單特異性抗體在結構和生物學上的差異，為BsAbs開發生物活性檢測策略帶來了獨-特的挑戰和考慮。本文總結了目前可用的生物分析技術平臺、生物活性檢測方法和相關的案例研究，以提供對設計BsAbs放行和表征策略的見解。了解和開發良好的生物活性檢測對于BsAbs的整體控制策略至關重要，它們將隨著BsAbs分子和現有分析技術的發展而不斷發展。

本文由義翹神州進行整理，同時提供快速高效的雙特異性抗體表達服務。從抗體序列開始，我們可以表達多種雙特異性抗體形式，如BiTE、Diabody、CrossMab和DVD-IgG。

參考文獻：

Register AC, Tarighat SS, Lee HY. Bioassay Development for Bispecific Antibodies-Challenges and Opportunities. Int J Mol Sci. 2021;22(10):5350. Published 2021 May 19. doi:10.3390/ijms22105350