1. 背景介紹
毛細管電色譜(CEC)結合了毛細管電泳(CE)和高效液相色譜(HPLC)的較佳特點:CE 的分離效率高,高效液相色譜的多選擇性和大樣本容量。近年來,對映體的分離受到了廣泛關注,許多 HPLC 中常見的手性固定相被用在CEC 中,例如環糊精、纖維素、大環內酯類抗生素、陰離子交換型固定相和分子印跡聚合物等。然而,當在沒有壓力的情況下使用 CEC 時,特別是對于填充柱,仍然存在與氣泡形成和柱干涸相關的問題和困難,在開管和整體柱中不會出現這個問題。熔融玻璃管壁似乎是形成氣泡的重要因素。對于填充柱中出現的氣泡和柱干涸的問題,可以通過高效微流電動液相色譜(eHPLC)系統解決, 其流動相由壓力流和電滲流(EOF)共同驅動。
在 eHPLC 系統中,可以在毛細管色譜柱的出口端和進口端施加一個大于 1000 psi 的壓力,這樣就可以避免在使用 CEC 模式時出現氣泡和柱干涸等問題。同時,eHPLC 系統中樣品可通過旋轉式注射器實現定量引入。另外,EOF 可以與整個流動相的方向相同或相反,因此可以影響樣品洗脫順序。更重要的是 EOF 適用于梯度洗脫模式。因此,通過eHPLC 系統,CEC 的優勢可以充分的實現。
我們選取一種大環內酯類抗生素-萬古霉素作為手性固定相,建立了 eHPLC 系統分離檢測手性藥物的方法。
2. 測試條件
儀器: | TriSep ®-3000 高效微流電動液相色譜系統 |
3. 測試結果
圖 1 高效微流電動液相色譜法(實線)和毛細管液相色譜法(虛線)檢測手性藥物色譜圖
注: a 異丙嗪;b 卡替洛爾; c 塞利洛爾;d 沙丁胺醇
4. 結論
采用 TriSep ®-3000 高效微流電動液相色譜系統,并在有機相中加入萬古霉素做手性固定相,可實現異丙嗪、 卡替洛爾、塞利洛爾和沙丁胺醇的分離檢測。并且得到,在相同的條件下,高效微流電動液相色譜法的效率和分辨率高于毛細管液相色譜法。
5. 配置列表
儀器配置 | TriSep ®-3000 高效微流電動液相色譜系統(配二元梯度泵、柱溫箱、UV 檢測器、高壓電源、自動進樣器、微流控、控制器) |
Clarity Lite 色譜工作站 |
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