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如何校準(zhǔn)PE紫外分光光度計(jì)?

閱讀:119      發(fā)布時(shí)間:2025-2-24
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  校準(zhǔn)PE紫外分光光度計(jì)需要遵循一系列詳細(xì)且系統(tǒng)的步驟,以確保儀器的準(zhǔn)確性和可靠性。以下是具體的校準(zhǔn)步驟:
  一、校準(zhǔn)前的準(zhǔn)備工作
  1.儀器檢查與清潔
  確保紫外分光光度計(jì)安裝在穩(wěn)定、干燥、低溫且無振動(dòng)的環(huán)境中,周圍無強(qiáng)磁場干擾和腐蝕性氣體。
  檢查儀器外觀是否有損壞,各部件連接是否正常,如比色皿架、電源線等。
  使用干凈的擦鏡紙或柔軟的布輕輕擦拭儀器的外殼、樣品室、比色皿等,去除灰塵、油污和其他雜質(zhì)。
  2.試劑準(zhǔn)備
  根據(jù)校準(zhǔn)需求,準(zhǔn)備一系列濃度已知的標(biāo)準(zhǔn)溶液,用于波長校準(zhǔn)和吸光度校準(zhǔn)。例如,常用的重鉻酸鉀溶液可用于可見光區(qū)的校準(zhǔn),硝酸鈉溶液可用于紫外光區(qū)的校準(zhǔn)。
  準(zhǔn)備好純?nèi)軇┳鳛榭瞻自噭缯麴s水、乙醇等,其純度應(yīng)符合分析要求。
  3.儀器預(yù)熱
  打開紫外分光光度計(jì)的電源開關(guān),讓儀器預(yù)熱一段時(shí)間,通常預(yù)熱10~30分鐘,使儀器的光源、檢測器等部件達(dá)到穩(wěn)定的工作狀態(tài)。
  二、波長校準(zhǔn)
  1.選擇標(biāo)準(zhǔn)溶液
  選擇合適的具有已知最大吸收波長的標(biāo)準(zhǔn)溶液,將其倒入比色皿中,用擦鏡紙擦干比色皿外壁,避免手上的油污對(duì)比色皿透光性產(chǎn)生影響。
  將裝有標(biāo)準(zhǔn)溶液的比色皿放入樣品室中的比色皿架上,注意放置方向要正確,使光路通過溶液。
  2.設(shè)置參數(shù)
  在儀器的操作界面上,選擇光譜掃描模式,設(shè)置掃描的波長范圍應(yīng)包括標(biāo)準(zhǔn)溶液的最大吸收波長,掃描速度適中,采樣間隔一般為1nm或更小。
  啟動(dòng)掃描程序,儀器將自動(dòng)繪制出標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸收光譜曲線。
  3.調(diào)整與記錄
  觀察吸收光譜曲線,找到最大吸收波長對(duì)應(yīng)的波峰位置。
  如果該波峰位置與標(biāo)準(zhǔn)溶液的已知最大吸收波長不一致,說明儀器的波長存在偏差。此時(shí),需要通過儀器上的波長調(diào)節(jié)按鈕或相關(guān)操作菜單,對(duì)波長進(jìn)行微調(diào),使測量得到的最大吸收波長與標(biāo)準(zhǔn)值相符。
  反復(fù)調(diào)整和測量,直到波長誤差在允許范圍內(nèi),一般要求波長準(zhǔn)確度誤差不超過±0.5nm。
  三、吸光度校準(zhǔn)
  1.空白校正
  取出裝有標(biāo)準(zhǔn)溶液的比色皿,將裝有純?nèi)軇┑谋壬蠓湃霕悠肥抑械膮⒈瘸匚恢茫P(guān)上樣品室蓋。
  在操作界面上選擇吸光度測量模式,點(diǎn)擊“調(diào)零”或“空白校正”按鈕,儀器將以純?nèi)軇榭瞻祝瑢⑽舛戎嫡{(diào)整為零。這樣可以消除溶劑本身對(duì)光的吸收以及比色皿等因素對(duì)測量結(jié)果的影響。
  2.標(biāo)準(zhǔn)溶液測量
  將裝有標(biāo)準(zhǔn)溶液的比色皿放入樣品室中的樣品池位置,關(guān)上樣品室蓋。
  如果實(shí)際測量值與理論值存在偏差,說明儀器的吸光度存在誤差。此時(shí),需要通過儀器上的吸光度調(diào)節(jié)按鈕或相關(guān)操作菜單,對(duì)吸光度進(jìn)行校準(zhǔn),使測量值與理論值相符。
  可以多次重復(fù)測量和校準(zhǔn),直到吸光度誤差在允許范圍內(nèi),一般要求吸光度準(zhǔn)確度誤差不超過±0.005A。
 

 

  四、性能檢查與驗(yàn)證
  1.重復(fù)性檢查
  使用同一標(biāo)準(zhǔn)溶液,在相同的條件下,連續(xù)多次測量其吸光度值,計(jì)算測量結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。一般來說,RSD應(yīng)小于0.5%,以證明儀器的重復(fù)性良好。
  2.線性范圍檢查
  配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,按照從低到高的順序依次測量其吸光度值。
  然后以濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。觀察標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系是否良好,相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于0.999,以證明儀器在測量范圍內(nèi)的線性關(guān)系正常。
  五、注意事項(xiàng)
  1.校準(zhǔn)環(huán)境應(yīng)保持穩(wěn)定,避免溫度、濕度等環(huán)境因素對(duì)校準(zhǔn)結(jié)果產(chǎn)生影響。
  2.使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時(shí)應(yīng)確保其有效期內(nèi)、儲(chǔ)存條件正確,以保證其準(zhǔn)確性。
  3.校準(zhǔn)過程中應(yīng)遵循操作規(guī)程,避免誤操作導(dǎo)致儀器損壞或校準(zhǔn)結(jié)果失真。
  4.校準(zhǔn)結(jié)果應(yīng)及時(shí)記錄并保存,以便后續(xù)分析和比對(duì)。
  通過遵循以上步驟和注意事項(xiàng),可以確保PE紫外分光光度計(jì)的準(zhǔn)確性和可靠性,為實(shí)驗(yàn)結(jié)果提供有力的保障。

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