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鎳柱純化原理:過渡金屬通過與電子供體配基上,能與金屬離子相互作用的羧基或氨基的電負性元素(O,N),形成較穩定的金屬螯合物。在IMAC中,一個Ni2+有六個配位位點,被含有3,4或5個電子供體基團(配位位點)的螯合物固定在吸附劑上,而剩下未被占據的位點暴露于溶液中,能與一些氨基酸的側鏈或His標簽的蛋白特異性結合。
在Ni柱的使用中,應當避免緩沖液中存在還原劑和螯合劑,以免Ni2+被還原而脫落。如果柱料使用太久積累了很多雜蛋白,可用EDTA將Ni2+螯合下來,再用NaOH清洗柱料后,重新螯合Ni離子,即可完成再生。
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