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LightCycler 480 II 實時熒光定量PCR儀（Roche Diagnostics）

一、設備概述

LightCycler 480 II 是 Roche Diagnostics 研發的一款高通量、全自動實時熒光定量PCR（qPCR）儀器。該設備采用創新的熱循環技術，結合先進的熒光檢測系統，能夠顯著提高實驗效率，同時確保高精度和高重復性的檢測結果。LightCycler 480 II 適用于基因表達分析、基因分型、突變檢測、病原體檢測等多種應用，特別適合需要高精度定量和大規模實驗的研究需求。

二、主要特點

1. 高通量支持

LightCycler 480 II 支持 96 孔板和384 孔板兩種格式，滿足不同實驗通量的需求。高通量能力使其特別適用于大規模基因篩選和臨床樣本檢測。

2. 創新的熱循環技術

該設備采用高效的銀合金模塊，確保熱傳遞的均勻性和快速升降溫能力。溫度均勻性對于PCR反應的準確性至關重要，LightCycler 480 II 通過優化熱循環系統，確保實驗的高精度和重復性。

3. 多通道熒光檢測

LightCycler 480 II 具備 5 個熒光檢測通道，能夠同時檢測多種熒光染料，包括 SYBR Green、TaqMan 探針等。其靈敏的光學系統能夠高效檢測熒光信號，使得多重PCR（Multiplex PCR）成為可能，大幅提高實驗效率。

4. 精確的定量分析

LightCycler 480 II 能夠進行絕對定量、相對定量、基因分型、溶解曲線分析等實驗，適用于多種研究領域。其強大的數據分析軟件支持標準曲線法、ΔΔCt 法等不同定量分析方法，確保數據的可靠性。

5. 直觀的軟件界面

配套的 LightCycler 軟件提供直觀的操作界面，可實現實時數據采集、擴增曲線分析、基因分型等功能。該軟件還能自動生成實驗報告，簡化數據管理流程。

6. 適應不同的實驗需求

LightCycler 480 II 兼容多種熒光探針、染料和 PCR 反應體系，能夠靈活適應不同的實驗需求，如：

• 基因表達分析

• 基因分型

• 突變檢測

• 病原體檢測

• 藥物篩選

三、應用領域

1. 基因表達分析

LightCycler 480 II 通過實時熒光檢測，精準量化基因表達水平，適用于研究細胞信號通路、疾病機制及藥物作用。

2. 基因分型

該設備可用于 SNP（單核苷酸多態性）檢測和等位基因分型，廣泛應用于遺傳學研究和個性化醫學領域。

3. 突變檢測

可用于檢測腫瘤相關基因突變、病毒變異株等。高靈敏度的熒光檢測系統確保微量突變的準確識別。

4. 病原體檢測

LightCycler 480 II 可用于檢測病毒、細菌和其他病原微生物，特別適用于臨床診斷和公共衛生監測。

5. 藥物篩選

可用于篩選影響基因表達的候選藥物，評估藥物的作用機制。

四、操作流程

1. 樣本準備

• 提取 DNA/RNA

• 進行逆轉錄（如 RNA 需要轉錄為 cDNA）

2. PCR 反應體系配置

• 添加 PCR 反應緩沖液、熒光探針/染料、酶、引物等

• 配置標準曲線（如需要）

3. 裝載樣本

• 使用 96 孔或 384 孔 PCR 板

• 進行密封，防止蒸發

4. 設置 PCR 程序

• 配置擴增步驟，如變性、退火、延伸等

• 選擇檢測通道和數據采集模式

5. 運行 PCR 反應

• 啟動 LightCycler 480 II

• 實時監測熒光信號，記錄擴增曲線

6. 數據分析

• 生成擴增曲線、標準曲線、Ct 值分析等

• 輸出實驗報告

五、維護與保養

為了保持 LightCycler 480 II 的最佳性能，建議定期進行以下維護：

1. 清潔光學組件

• 使用適當的清潔溶劑擦拭檢測模塊，避免灰塵影響熒光檢測。

2. 溫控系統校準

• 定期進行溫度均一性測試，確保加熱模塊工作正常。

3. 軟件升級

• 確保 LightCycler 軟件版本最新，以獲得最新的數據分析功能。

4. 日常檢查

• 運行空白實驗，確保儀器沒有背景熒光污染。

六、技術參數一覽

七、總結

LightCycler 480 II 是一款高通量、高精度的實時熒光定量 PCR 儀器，特別適用于需要進行大規模樣本分析的實驗室。其先進的熱循環技術、靈敏的熒光檢測系統和直觀的軟件操作界面，使其成為分子生物學研究、臨床診斷和藥物篩選等領域的重要工具。無論是基因表達分析、基因分型，還是病原體檢測，LightCycler 480 II 都能提供可靠的實驗結果，為科學研究和醫療應用提供有力支持