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瀏覽次數(shù)賽默飛7500型實時熒光定量PCR儀（Applied Biosystems 7500）介紹
一、概述
賽默飛（Thermo Fisher Scientific）旗下的Applied Biosystems 7500型實時熒光定量PCR儀（7500 Real-Time PCR System）是一款高性能的實時熒光定量PCR（qPCR）儀器。它被廣泛應用于基因表達分析、病原檢測、突變檢測、基因拷貝數(shù)分析等多個分子生物學研究和臨床檢測領(lǐng)域。7500型PCR儀結(jié)合精確的光學檢測系統(tǒng)、智能化數(shù)據(jù)分析軟件和穩(wěn)定的溫控系統(tǒng)，可提供高靈敏度和高通量的qPCR檢測，滿足科研、醫(yī)療及工業(yè)實驗室的需求。
二、主要特點
7500型實時熒光定量PCR儀在光學系統(tǒng)、檢測通道、數(shù)據(jù)分析等方面具有明顯的優(yōu)勢，適用于各種PCR實驗。
1. 高精度光學檢測系統(tǒng)
優(yōu)化的光學設計，能夠準確采集熒光信號，提高檢測靈敏度。
支持多種熒光檢測方式，兼容SYBR Green染料和TaqMan探針技術(shù)。
快速數(shù)據(jù)采集，提高擴增曲線的準確性，確保數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性。
2. 靈活的熒光檢測通道
支持5個熒光通道，能夠進行多重PCR實驗，檢測多個目標基因。
兼容多種熒光染料（FAM™、VIC®、ROX™、SYBR® Green等），適用于不同類型的實驗。
3. 精確的溫控系統(tǒng)
高效的Peltier熱循環(huán)系統(tǒng)，確保樣品孔間溫度均一性，提高擴增的重復性和可靠性。
快速升降溫，縮短實驗時間，提高工作效率。
4. 強大的數(shù)據(jù)分析軟件
Applied Biosystems專用軟件，支持標準曲線分析、相對定量分析（2-ΔΔCt方法）、絕對定量分析等數(shù)據(jù)處理功能。
直觀的用戶界面，可自動計算Ct值、熔解曲線分析，支持導出實驗報告。
5. 兼容多種樣本板型
支持96孔板，適用于中等通量實驗需求。
兼容各種PCR反應體系，包括TaqMan探針法、SYBR Green熒光染料法。
6. 可靠的實驗重復性
通過優(yōu)化的檢測和溫控系統(tǒng)，保證數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性和重復性，適用于科研實驗、臨床診斷、環(huán)境檢測等領(lǐng)域。
三、技術(shù)規(guī)格
| 參數(shù) | 詳細信息 |
|---|---|
| 熒光通道 | 5個（支持多重PCR） |
| 檢測模式 | SYBR Green、TaqMan探針 |
| PCR反應板 | 96孔板 |
| 溫控精度 | ±0.25°C |
| 熒光檢測范圍 | FAM™, VIC®, ROX™, NED™, TAMRA™ |
| 數(shù)據(jù)分析 | 絕對定量、相對定量、基因分型、熔解曲線分析 |
| 軟件支持 | Applied Biosystems 7500 Software |
| 升降溫速率 | 3.5°C/s |
四、適用領(lǐng)域
1. 基因表達分析
通過實時PCR檢測特定基因的表達水平，適用于生物醫(yī)學研究、藥物研發(fā)等領(lǐng)域。
可使用SYBR Green染料法或TaqMan探針法進行高靈敏度的基因表達定量分析。
2. 病原體檢測
7500型PCR儀可檢測細菌、病毒（如SARS-CoV-2、流感病毒、HIV等），適用于傳染病檢測。
高靈敏度檢測可確保低拷貝病原DNA/RNA的可靠檢測。
3. 突變檢測與基因分型
適用于SNP（單核苷酸多態(tài)性）分析、點突變檢測、腫瘤基因突變研究等。
結(jié)合TaqMan探針技術(shù)，可實現(xiàn)高特異性的基因分型分析。
4. 司法鑒定與食品安全
適用于DNA指紋鑒定、食品安全檢測（如轉(zhuǎn)基因食品檢測）。
通過實時PCR技術(shù)，可快速鑒定樣本來源，提高實驗效率。
五、操作流程
7500型PCR儀的使用流程如下：
1. 樣品準備
提取DNA或RNA，進行濃度測定和純化。
選擇合適的PCR反應體系（SYBR Green或TaqMan探針）。
配制PCR反應液，包括引物、探針、dNTPs、PCR緩沖液、熒光染料或探針。
2. 加樣與PCR板準備
將PCR反應體系分裝至96孔PCR板，每孔體積通常為10-50 µL。
使用封膜密封PCR板，避免交叉污染。
3. 運行PCR程序
在7500 PCR儀的軟件中創(chuàng)建實驗：
設定PCR反應條件（變性、退火、延伸）。
選擇熒光通道并設置數(shù)據(jù)采集模式。
啟動PCR實驗，實時監(jiān)測熒光信號變化。
4. 數(shù)據(jù)分析
通過儀器自帶的軟件分析Ct值，計算基因表達水平或DNA拷貝數(shù)。
生成擴增曲線、標準曲線，進行數(shù)據(jù)比對。
六、數(shù)據(jù)分析
1. Ct值計算
**Ct（閾值循環(huán)數(shù)）**表示PCR擴增產(chǎn)物的檢測閾值，Ct值越低，表示初始DNA/RNA濃度越高。
用于基因表達分析、病原體檢測等實驗。
2. 絕對定量分析
通過標準曲線計算DNA/RNA拷貝數(shù)，適用于病毒載量檢測等研究。
3. 相對定量分析（ΔΔCt法）
比較實驗組和對照組基因表達水平，廣泛應用于藥物研究、癌癥生物標志物分析。
七、實驗注意事項
確保樣品純度：DNA/RNA質(zhì)量影響擴增效率，應避免蛋白或其他雜質(zhì)污染。
正確設置熒光通道：不同的熒光探針需要匹配相應的檢測通道。
避免交叉污染：使用無RNA/DNA酶的移液器和試劑，嚴格遵循無菌操作流程。
優(yōu)化引物設計：避免二聚體形成，提高PCR特異性和擴增效率。
八、總結(jié)
賽默飛7500型實時熒光定量PCR儀憑借高靈敏度的熒光檢測、精準的溫控系統(tǒng)、強大的數(shù)據(jù)分析功能，已成為基因組研究、病原檢測、臨床診斷等領(lǐng)域的常見PCR設備。其多通道檢測、兼容多種熒光探針、支持高通量檢測的特點，使其適用于從基礎研究到應用檢測的各種實驗需求。通過合理優(yōu)化實驗條件，7500型PCR儀能夠提供高精度、穩(wěn)定可靠的PCR定量分析結(jié)果，為科研人員和臨床醫(yī)生提供強有力的實驗支持。
