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賽默飛Thermo實時熒光定量PCR儀 CFX96 全面介紹
實時熒光定量PCR(Quantitative Polymerase Chain Reaction, qPCR)是一種基于熒光信號檢測的分子生物學技術,用于實時監測和定量分析DNA或RNA擴增過程。賽默飛(Thermo Fisher Scientific)作為生命科學技術公司,其CFX96實時熒光定量PCR儀以高靈敏度、高準確性和靈活性廣受認可,是一款適用于科研、臨床診斷以及工業應用的高性能儀器。本文將從CFX96的特點、技術參數、操作流程及應用領域等方面,全面介紹這一儀器。
一、儀器概述
賽默飛CFX96實時熒光定量PCR儀是一款以96孔板為基礎的高通量、高靈敏度的qPCR儀器。CFX96專為滿足基因檢測、表達分析、病原體檢測、基因分型及突變研究等多種實驗需求而設計。其核心特點是擁有強大的光學檢測系統、快速高效的溫控系統以及直觀易用的軟件支持,為用戶提供了靈活的實驗方案和可靠的數據支持。
CFX96兼容多種熒光標記體系(如SYBR Green、TaqMan探針等),具有開放式平臺設計,適應性強。儀器通過精準的熒光信號檢測實現對樣品擴增過程的實時監控,為科學研究提供精準的實驗數據。
二、主要特點
1. 多通道光學系統
CFX96配備了先進的5通道光學檢測系統,可同時監測多達5種熒光信號。這種多通道設計支持多靶標檢測,使得單次實驗能夠檢測多種基因,為基因表達研究和復雜分子診斷提供了強大的工具。
2. 高靈敏度和寬動態范圍
CFX96采用高性能光學檢測模塊,能夠檢測低至單拷貝的DNA或RNA,靈敏度。同時,其寬動態范圍允許從高濃度到低濃度樣品的準確定量分析,確保實驗數據的準確性和重復性。
3. 快速高效的溫控系統
CFX96使用Peltier加熱模塊,提供了快速升降溫的能力,使PCR反應更高效。其溫控均一性可達±0.2℃,在樣品間提供一致的擴增條件,確保數據的可靠性。
4. 靈活的試劑兼容性
CFX96是一款開放式平臺,支持多種試劑體系,如SYBR Green染料、TaqMan探針和分子信標等。用戶可以根據實驗需求選擇適合的試劑和耗材,降低實驗成本,同時提高實驗設計的靈活性。
5. 用戶友好的軟件系統
CFX96配備了強大的配套軟件,支持以下功能:
絕對定量:通過標準曲線法確定未知樣品的濃度;
相對定量:分析不同條件下目標基因的表達變化;
基因分型:區分不同基因型;
熔解曲線分析:用于區分特異性擴增和非特異性擴增產物;
突變分析:用于基因突變位點檢測。
軟件界面簡潔直觀,實驗設置和數據分析功能豐富,降低了用戶的操作難度。此外,軟件支持實驗報告自動生成和多種數據導出格式,便于實驗結果分享和歸檔。
6. 高通量能力
CFX96支持96孔板格式,適合中高通量實驗需求。其快速PCR模式可顯著縮短實驗時間,為時間緊迫的實驗提供了解決方案。
7. 緊湊設計與多功能性
CFX96設計緊湊,占用實驗室空間小,適合各類實驗室環境。其靈活性和多功能性使其在科研和應用實驗中都表現出色。
三、技術參數
1. 光學性能
光學系統:5通道獨立光學檢測;
熒光染料:支持SYBR Green、FAM、HEX、VIC、ROX、Texas Red、Cy5等多種熒光標記;
動態范圍:可檢測10個數量級;
靈敏度:單拷貝靶標檢測。
2. 溫控性能
樣品模塊:96孔板;
溫控范圍:4℃至99.9℃;
溫控均一性:±0.2℃;
升降溫速度:最高可達5℃/秒。
3. 數據分析
分析功能:支持標準曲線繪制、Ct值計算、熔解曲線分析、基因分型等;
導出格式:兼容.xlsx、.txt、.pdf等多種格式。
4. 兼容性
試劑:支持多種熒光染料和探針試劑;
耗材:適配標準96孔板及PCR管。
5. 尺寸與重量
儀器尺寸:約33 cm × 50 cm × 50 cm;
重量:約30 kg。
四、操作流程
1. 樣品制備
從實驗材料(如組織、血液、細胞)中提取DNA或RNA,通過逆轉錄將RNA轉化為cDNA(若為RNA樣品)。配置PCR反應體系,包括引物、探針或熒光染料、反應緩沖液及模板DNA或cDNA。
2. 儀器設置
打開CFX96儀器,啟動軟件;
根據實驗設計選擇檢測模式(SYBR Green、TaqMan探針等);
配置擴增程序,包括退火溫度、循環次數等;
分配熒光通道和目標基因信息。
3. 實驗運行
將樣品加載至96孔板中并密封,將樣品板放入儀器中,啟動實驗程序。CFX96將實時監測擴增過程并記錄熒光信號。
4. 數據分析
實驗完成后,軟件自動生成擴增曲線、Ct值和熔解曲線等實驗結果。用戶可以進一步分析數據,并根據實驗需求導出或保存結果。
五、應用領域
CFX96實時熒光定量PCR儀因其高靈敏度、多功能性和靈活性,被廣泛應用于以下領域:
1. 基因表達研究
利用相對定量方法,研究目標基因在不同條件下的表達水平,為基因功能研究和生物學機制探索提供數據支持。
2. 病原體檢測
檢測和定量分析微生物、病毒和其他病原體的核酸,廣泛應用于傳染病診斷、食品安全檢測及環境監測。
3. 基因分型
通過熒光信號區分不同基因型,應用于個體化醫療、遺傳病篩查和藥物基因組學研究。
4. 突變分析
檢測單核苷酸多態性(SNP)和基因突變,用于癌癥研究、藥物開發及精準醫療。
5. 分子診斷
CFX96在遺傳性疾病檢測、腫瘤標志物分析和藥物靶點研究中具有重要作用,為分子診斷領域提供技術支持。
6. 藥物研發
支持高通量基因表達篩選和藥物毒理學研究,用于分析藥物對基因表達的影響和潛在靶點的篩選。
六、優勢總結
高性能光學系統:CFX96支持多通道實時檢測,提供精確可靠的數據。
靈活開放的設計:兼容多種試劑和耗材,適應不同實驗需求。
高通量能力:96孔板設計適合中高通量實驗,支持快速模式。
用戶友好軟件:操作簡單,數據分析功能強大,適合不同層次用戶。
廣泛應用領域:涵蓋基礎研究、臨床診斷及工業應用。
七、總結
賽默飛CFX96實時熒光定量PCR儀是一款高性能、多功能、靈活的qPCR儀器,適用于多種分子生物學研究和臨床診斷需求。其先進的光學檢測技術、高靈敏度、寬動態范圍和高通量實驗能力,使其成為基因檢測、病原體分析和精準醫療研究的理想選擇。CFX96不僅能滿足現代科研對高精度數據的需求,也能在未來的分子診斷和生物技術開發中繼續發揮重要作用,為推動科學進步提供強有力的支持。