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T4噬菌體基因32編碼蛋白試劑(T4 gene 32 protein, GP32 Protein)是一種單鏈 DNA（ssDNA）結(jié)合蛋白，為T4噬菌體DNA復(fù)制和修復(fù)所必需。它協(xié)調(diào)性地結(jié)合并穩(wěn)定瞬時形成的ssDNA區(qū)域，在T4 噬菌體DNA復(fù)制過程中起著重要的結(jié)構(gòu)性作用。該蛋白也被廣泛地用于穩(wěn)定和標(biāo)記ssDNA區(qū)域，以便用電子顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)DNA的結(jié)構(gòu)。最新報道表明T4噬菌體基因32 編碼蛋白可以促進(jìn)限制性內(nèi)切酶的消化反應(yīng)、RT-PCR 中反轉(zhuǎn)錄的效率、增強(qiáng)T4 DNA聚合酶的活性和提高PCR的產(chǎn)量。

應(yīng)用

在 RT-PCR 過程中，增加反轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)量和延伸能力

土壤樣品進(jìn)行 PCR 時，增加目的片段的產(chǎn)量和特異性

穩(wěn)定和標(biāo)記 ssDNA 結(jié)構(gòu)

儲存

-20℃可保存3年。

使用注意事項(xiàng)

（1） 該蛋白分子量為33kD。

（2）該蛋白不含有甘油成分，可用于凍干體系建立。

（3）該蛋白的最佳反應(yīng)溫度為37°C，65°C 20min可使該蛋白失活。

T4噬菌體基因32編碼蛋白試劑恒溫擴(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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