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T4 多聚核苷酸激酶試劑能夠催化ATP的 γ-位磷酸基團轉移到寡核苷酸鏈（雙鏈或單鏈DNA或RNA）的 5’-羥基末端以及3’

-單磷酸核苷上。T4 多聚核苷酸激酶還具有3’磷酸酶活性，將3’-磷酸基團從寡核苷酸的3’磷酸末端、脫氧3’-單磷酸核苷和

脫氧3’-二磷酸核苷上水解掉。該酶經修飾后，其3’磷酸酶活性缺失，但仍保留了所有激酶的活性。

組分

組分名稱數量

T4 Polynucleotide Kinase (10 U/μl)100 μl

10×T4 PNK Buffer0.5 ml

10mM ATP100 μl

應用

DNA 或 RNA 5′ 末端的磷酸化，以便進行連接反應。

DNA 或 RNA 的末端標記，用作探針和進行 DNA 測序

將 3′ 端已經磷酸化的單核苷酸 5′ 磷酸化，制備pNp 底物，用于添加到 DNA 或 RNA的 3′ 端

對 3′ 端有磷酸基團的寡核苷酸的 5′ 端進行標記

活性定義

1 單位指 37℃條件下，30 分鐘內催化1nmol 酸不溶性[32P] 摻入所需要的酶量。

儲存

-20℃可保存2年。

T4 多聚核苷酸激酶試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果，可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。

應用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應結束后，倒置反應管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現出醒目的綠色，陰性表現出橙色，區分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。

應用實例3：A3825-01 紅黃變色反應（肉眼觀察）

以 體外轉錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起

始前，下圖為 65 度反應 30min 后。

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