NaOH/SDS溶液 核酸類

產品貨號：T11027

產品規格：2×100ml/2×500ml

產品簡介：

堿裂解法是常用的小量制備質粒DNA的方法，可用于抽提微克級別的質粒DNA。葡萄糖-Tris-EDTA溶液(GTE)、NaOH/SDS溶液和乙酸鉀溶液(5mol/L,pH4.8)是其常用試劑。NaOH/SDS溶液由NaOH溶液和SDS溶液等組成，臨用前等量混合使用，溶液呈堿性，是堿裂解法提DNA的重要成分。其原理是：當菌體在NaOH和SDS溶液中裂解時，蛋白質與DNA發生變性，加入中和液（乙酸鉀溶液）后，質粒DNA分子迅速復性，呈溶解狀態，離心時留在上清中，由于蛋白質和染色體DNA不復性而呈絮狀，離心時可沉淀下來。該試劑僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。

產品組成：

操作步驟(僅供參考)：

1. 配置 NaOH/SDS 溶液：取 NaOH 溶液和 SDS 溶液等比例混合后使用，宜臨用前配置。

2. 接種一個單菌落于 LB 培養基中，37℃培養至飽和狀態。

3. 取 1.5ml 培養液，10000～12000g 離心 20～60s，棄上清。

4. 用 100μl 葡萄糖-Tris-EDTA 溶液*重懸沉淀，室溫靜置 5min。

5. 加入 200μl 新鮮配置的 NaOH/SDS 溶液，顛倒混勻數次，可在冰上放置 2~5min，使細胞膜破裂。

6. 加入 150μl 乙酸鉀溶液，將管溫和顛倒數次混勻，見白色絮狀沉淀，可在冰上放置 3~5min，此時，質量 DNA復性，染色體和蛋白質不可逆變性，形成不可溶復合物。

7. 加入 150μl 酚氯仿異戊醇，震蕩混勻，4℃12000r/min 離心 10min。繼續后續實驗。

注意事項：

1. NaOH 溶液呈強堿性，請小心操作，如果皮膚接觸，應盡快擦干并用流水充分沖洗。

2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：12個月。

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