核糖體提取試劑盒

產品貨號：BA1804

產品規格：50T/100T

產品簡介：

核糖體是細胞內一種核糖核蛋白顆粒(ribonucleoprotein particle)，主要由RNA和蛋白質構成，其惟一功能是按照mRNA的指令將氨基酸合成蛋白質多肽鏈，所以核糖體是細胞內蛋白質合成的分子機器。核糖體無膜結構，主要由蛋白質(40%)和RNA(60%)構成.核糖體按沉降系數分為兩類，一類存在于細菌等原核生物中，另一類存在于真核細胞的細胞質中。他們有的漂浮在細胞內，有的結集在一起。

核糖體提取試劑盒可用于各種動物細胞和實體軟、硬組織樣本的核糖體的提取。

本試劑僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。

產品組成：

自備儀器和試劑耗材：
儀器：離心機、渦旋混勻器、Dounce勻漿器、移液器、冰箱、冰盒
耗材：離心管、吸頭
試劑：PBS(pH7.4，實驗室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液phosphate buffer saline/Dμlbecco’s PBS：約含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)，也可用HBSS

使用方法：
使用注意事項：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

2. 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

3. 最好使用Dounce勻漿器勻漿，如果沒有Dounce勻漿器，用普通1ml玻璃勻漿器勻漿也可。

細胞核糖體提取：

1. 取1-2×10⁷個細胞，在4℃，500×g條件下離心5分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞；

2. 用冷PBS洗滌兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
【注】：在500g條件下離心5分鐘。

3. 加入500μl-1ml冷的試劑A，置冰上10分鐘。

4. 用Dounce勻漿器勻漿30-40下。

5. 將勻漿液在4℃，1000g力條件下離心5分鐘。棄沉淀，收集上清。

6. 將上清在4℃，20000g力條件下離心10分鐘，棄沉淀，收集上清。

7. 將上清在4℃，100000g力條件下離心60分鐘。棄上清，收集沉淀。
【注】：如果條件允許，可將離心時間延長到24小時。

8. 在沉淀中加入400μl冷的試劑B，混勻。

9. 在4℃，100000g 力條件下離心60分鐘。
【注】：如果條件允許，可將離心時間延長到24小時。

10. 棄上清，沉淀用核糖體保存液重懸。

11. 即得到核糖體樣品，置冰箱備用或直接用于下游實驗。

組織核糖體提取：

1. 取50-100mg 鮮動物組織樣本，用PBS洗滌干凈。

2. 用剪刀盡可能剪碎，用冷PBS洗滌兩次。
【注】：在500g條件下離心5分鐘。

3. 加入500μl-1ml冷的試劑A，置冰上10分鐘。

4. 用Dounce勻漿器充分勻漿30-40下，至無明顯固體團塊。然后在4℃，1000g力條件下離心5分鐘。

5. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管。

6. 在4℃，20000g力條件下離心10分鐘，棄沉淀，收集上清。

7. 將上清在4℃，100000g力條件下離心60分鐘。棄上清，收集沉淀。
【注】：如果條件允許，可將離心時間延長到24小時。

8. 在沉淀中加入400μl冷的試劑B，混勻。

9. 在4℃，100000g力條件下離心60分鐘。
【注】：如果條件允許，可將離心時間延長到24小時。

10. 棄上清，沉淀用核糖體保存液重懸。

11. 即得到核糖體樣品，置冰箱備用或直接用于下游實驗。

保存條件：2-8℃，12個月有效。