果膠酶檢測試劑盒（DNS微板法）

產品貨號：BA1545

產品規格：100T

產品簡介：

天然果膠類物質以原果膠、果膠(Pectin)、果膠酸的形態廣泛存在于植物的果實、根、莖、葉中，是細胞壁的一種組成成分，它們伴隨纖維素而存在，構成相鄰細胞中間層粘結物，使植物組織細胞緊緊黏結在一起。果膠酶(Pectinase)是一類分解果膠質酶類的總稱，實質是多聚半乳糖醛酸水解酶，包括原果膠酶，果膠酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果膠裂解酶四大類，廣泛存在于植物果實和微生物中，主要用于食品、釀酒、環保、醫藥、紡織及日化用品行業。

果膠酶檢測試劑盒(DNS微板法)檢測原理是果膠酶水解果膠生成β-半乳糖醛酸，通過二硝基水楊酸(DNS)與反應形成紫紅色的化合物，該化合物呈色強度與半乳糖醛酸濃度成正比，于酶標儀測定吸光度，通過與標準曲線比較，計算出樣品中果膠酶活性。該試劑盒主要用于定量檢測植物組織或果實中果膠酶，反應顏色越深，吸光度越大，果膠酶的活性越強。該100T試劑盒可以檢測約95-98次樣本。該試盒僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產品組成：

自備材料：

1.        蒸餾水

2.        實驗材料：桃子、李子、蘋果、杏等果實或其他植物組織

3.        研缽或勻漿器

4.        離心管或試管

5.        離心機

6.        水浴鍋

7.        96孔板

8.        酶標儀

操作步驟：

1.        果膠酶提取：取果實或其他植物組織，洗凈，擦干，稱取剪碎的新鮮樣品，置于提前4℃預冷的研缽或勻漿器，加入預冷的Pectinase Lysis buffer，充分研磨或勻漿后轉入離心管或試管，離心。留取上清液，即為果膠酶提取液，保存待用。

2.        稀釋果膠標準溶液：取適量的果膠標準(1mg/ml)，按下表進行稀釋：

3.        加樣：按照下表設置空白管、標準管、對照管、測定管，溶液應按照順序依次加入，并注意避免產生氣泡，小心混勻。如果樣品中的果膠酶活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定。樣品的檢測最好能設置平行管，求平均值。

4.        測定：沸水浴，自來水中將離心管或試管冷卻至室溫，以蒸餾水稀釋，混勻。取上述空白管、標準管、測定管中溶液，加至96孔板的孔中，用酶標儀以空白調零，測定系列標準孔、對照孔、測定孔在吸光度。

計算：

以1-5號管系列果膠標準(4、8、12、16、20μg)為橫坐標，以對應的吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，直接計算直線回歸方程。以測定孔吸光度減去對照孔吸光度的差值作為測定吸光度值(A_測定)，帶入回歸方程求得的定管果膠酶含量，根據下述公式計算其活性：

組織樣品的果膠酶活性（μg/hg）=（m×v）/（W×t×V_S）

式中：m=根據標準曲線求得的測定管果膠酶含量（μg）

V=果膠酶提取液總體積（ml）

W=樣品鮮重（g）

t=37℃水浴時間（h）=1

V_S=測定時所取果膠酶提取液的體積（ml）=0.2

液體樣品的果膠酶活性(μg/h·ml)=m×N/V

式中：m=根據標準曲線求得的測定管果膠酶含量(μg)

N=稀釋倍數

V=測定時所取果膠酶提取液的體積(ml)=0.2

注意事項：

1.        取樣量、試劑用量應根據果膠含量適當調整。?

2.        可溶性糖對測定結果有較大影響，應*去除樣品中的可溶性糖。

3.        Pectinase?Lysis?buffer應密閉避光保存，避免有效成分揮發。?

4.        如果沒有酶標儀，也可以使用普通的分光光度計測定，但應考慮分光光度計的最小檢測體積。?

5.        為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：6個月有效。