過氧化氫（H2O2）含量檢測試劑盒（硫酸鈦比色法）

產品貨號：BA1543

產品規格：50T

產品簡介：

過氧化氫(H2O2)是生物體內最常見的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化產生，由CAT和POD等催化降解。H2O2不僅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互轉化的樞紐。生命體內積累的H2O2是由一些氧化物催化超氧陰離子發生氧化還原反應而形成，H2O2相對超氧陰離子性質穩定，但其存在可以直接或間接導致細胞膜脂質過氧化損害，加速細胞的衰老和解體，H2O2也是許多氧化應激反應中的關鍵調節因子。

過氧化氫(H2O2)檢測試劑盒(硫酸鈦比色法)其檢測原理是H2O2與硫酸鈦反應生成的過氧化物-鈦復合物黃色沉淀，溶解于強酸中，其黃色深淺與過氧化氫濃度在一定范圍內呈線性關系，可通過比色法檢測 412nm 處吸光度。該試劑盒主要用于檢測植物組織、血清、血漿等樣品中過氧化氫(H2O2)含量。該試劑盒僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產品組成：

自備材料：

1.        蒸餾水、丙酮

2.        勻漿器或研缽

3.        低溫離心機

4.        分光光度計、比色杯

操作步驟：（僅供參考）

1.  準備樣品：

①植物樣品：取正常或逆境下的新鮮植物組織，清洗干凈，擦干，切碎，迅速稱取5g，加入5ml預冷的丙酮，在冰浴條件下迅速勻漿或研磨，4℃ 12000g離心20min，收集上清液，測量提取液總體積，4℃保存備用。

②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，4℃保存，用于過氧化氫的檢測。

③高活性樣品：如果樣品中含有較高濃度的過氧化氫，可以使用丙酮進行恰當的稀釋。

2.  配制10mM H2O2標準溶液：由于過氧化氫不是非常穩定，使用前需自行測定過氧化氫

的實際濃度。本試劑盒提供的H2O2基液的H2O2濃度約為1M，用蒸餾水稀釋100倍,使H2O2濃度約為10mM。蒸餾水調零，分光光度計測定A₂₄₀，根據公式H2O2濃度(mM)=22.94×A₂₄₀計算出H2O2基液中H2O2的實際濃度，再用丙酮稀釋H2O2基液配制10mM H2O2-丙酮標準溶液。(一般情況下，新配制的10mM H2O2基液A₂₄₀為 0.4~0.45，3個月以后A₂₄₀為0.35~0.42)

按下表依次稀釋(常用濃度0.3-3mM,即1~5號)：

3.  配制硫酸鈦溶液：0.3g硫酸鈦加入6ml蒸餾水中，即為5%硫酸鈦溶液，4℃保存。

4.  H2O2加樣：按照下表設置空白管、標準管、測定管，溶液應按照順序依次加入，并注意避免產生氣泡。如果樣品中的H2O2濃度過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定，樣品的檢測最好能設置平行管。

5.  H2O2測定：混勻，室溫放置5min，12000g離心15min，棄上清液，留取沉淀，如有必要可加入預冷丙酮反復洗滌沉淀物。向各管的沉淀中加入2ml酸性基液，搖動，使沉淀*溶解。比色杯光徑1cm，空白管調零，分光光度計測定412nm處各標準管、測定管的吸光度，如果沒有分光光度計，亦可用酶標儀檢測。

計算：以系列丙酮-H2O2標準(0.3、0.5、0.8、1、3、5、8 mM)為橫坐標，以對應的吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，求得回歸方程。以測定管吸光度代入回歸方程求得待測樣品中H2O2的濃度。

組織樣品H2O2 (mmol/g)=(C₀×V_T×N)/m

液體樣品H2O2 (mmol/L)=C₀×N

式中：C₀=根據待測樣品的吸光度在標準曲線求得H2O2濃度(mM)

V_T=待測樣品的總體積(L)

m=樣品質量(g)

N=樣本稀釋倍數

注意事項：

1.        本試劑盒亦可用酶標儀進行檢測，但檢測的樣本數相應增加。

2.        加入堿性基液、硫酸鈦溶液時，應直接加入至溶液中，不要粘到管壁。

3.        過氧化物-鈦復合物黃色沉淀溶解于酸性基液時需要一段時間，需*溶解，否則有可能影響測定結果。

4.        H2O2基液和堿性基液應嚴格密閉保存，避免揮發，否則效率會下降。

5.        H2O2基液和酸性基液有一定腐蝕性，請小心操作。

6.        硫酸鈦溶解于水后應盡早使用，如暫時不用，可短期放置4℃冰箱保存。亦可用分析天平稱取一定量的粉劑，配置5%的濃度即可。

7.        為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：12個月有效。4℃運輸。