植物過氧化物酶（POD）檢測試劑盒（愈創(chuàng)木酚比色法）

產(chǎn)品貨號：BA1775

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品簡介：

過氧化物酶(peroxisome，POD)是以過氧化氫為電子受體催化底物氧化的酶，主要存在于細(xì)胞的過氧化物酶體中，以鐵卟啉為輔基，可催化過氧化氫，氧化酚類和胺類化合物，具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用，該酶屬于細(xì)胞木質(zhì)素合成途徑中間的關(guān)鍵酶，研究該酶可以探討多種生物細(xì)胞發(fā)育過程中木質(zhì)素沉積的代謝機(jī)理，為減少水果石細(xì)胞含量提高其品質(zhì)提供依據(jù)。

植物過氧化物酶(POD)檢測試劑盒(愈創(chuàng)木酚比色法)檢測原理是以愈創(chuàng)木酚(又稱2-甲氧基酚)作為底物，在酶促反應(yīng)的最適條件下采用每隔一定時(shí)間測定產(chǎn)物生成量的方法，于分光光度計(jì)470nm處測定吸光度，以吸光度變化所需酶量進(jìn)行計(jì)算，該試劑盒主要用于植物組織的裂解液或勻漿液、血清等樣品中內(nèi)源性的過氧化物酶活性，尤其適用于測定水果中過氧化物酶活性。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 蒸餾水

2. 研缽或勻漿器

3. 離心管

4. 低溫離心機(jī)

5. 水浴鍋或恒溫箱

6. 分光光度計(jì)、比色杯

操作步驟：

1. 準(zhǔn)備樣品：

①植物樣品：取2g植物組織或水果中層果肉加入4ml預(yù)冷的POD Lysis buffer研磨或勻漿，4℃ 10000g離心15~20min，留取上清液，即為POD粗提液，-20℃凍存，用于過氧化物酶的測定。

②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，-20℃凍存，用于過氧化物酶的測定。

③細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液，如有必要用POD Lysis buffer進(jìn)行適當(dāng)勻漿，4℃ 10000g離心 15~20min，留取上清液，即為POD粗提液，-20℃凍存，用于過氧化物酶的測定。

④高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的過氧化物酶，可以使用POD Lysis buffer進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2. 配制POD Assay buffer工作液：取適量的POD氧化劑和POD Assay buffer，按POD氧化劑：POD Assay buffer=1：14混合，即為POD Assay buffer工作液，即配即用，不宜久置。

3. POD加樣：按照下表設(shè)置對照管、測定管，注意：對照管、測定管中為同一待測樣品，但對照管中為提前加熱煮沸5min的樣品。溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡，如果樣品中的POD活性過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定，樣品的檢測最好能設(shè)置2平行管，求平均值。

4. POD測定：以對照管為對照(調(diào)零)，比色杯光徑1.0cm，立即分光光度計(jì)測定470nm處測定管的吸光度(記為A_{測定 0} )。

計(jì)算：

POD活性單位的定義：在該實(shí)驗(yàn)條件下，每1min吸光度變化0.01所需酶量為一個活性單位。

組織樣本 POD(U)={(A_測定1 -A_測定0 )×V _T }/(W×V _S ×0.01×t)

式中：A測定1 =孵育3min后測定管的吸光度

A測定0 =加入POD Assay buffer工作液后立即測定管的吸光度

W=組織樣本的重量(g)

V _T =提取酶液的總體積(ml)

V _S =測定時(shí)所用酶液體積(ml)

t=反應(yīng)時(shí)間(min)=3

液體樣本 POD(U)=(A_測定1 -A_測定0 )/(0.01×t)

式中：A_測定1 =孵育3min后測定孔的吸光度值

A_測定0 =加入POD Assay buffer工作液后立即測定的測定孔吸光度值

t=反應(yīng)時(shí)間(min)=3

注意事項(xiàng)：

1. 待測樣品中不能含有酶抑制劑，同時(shí)需避免反復(fù)凍融。

2. POD酶液提取時(shí)，注意低溫操作，防止酶活性。

3. 以煮沸的酶液為對照時(shí)，酶要充分失活。

4. POD氧化劑具有一定腐蝕性，請小心操作。

5. POD氧化劑易揮發(fā)，請密閉保存，否則檢測效率下降。

6. 如果沒有分光光度計(jì)，也可以使用普通的酶標(biāo)儀測定，每次檢測指標(biāo)不宜過多，否則操作時(shí)間不一，有可能導(dǎo)致樣本間的差異。

7. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期： 6個月有效。常溫運(yùn)輸，4℃保存。