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人皮膚肥大細胞

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更新時間:2023-04-21 15:46:41瀏覽次數:364

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產品簡介

供貨周期 現貨 規格 5×105cells/T25細胞培養瓶
主要用途 僅供科研實驗 組織來源 皮膚組織
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詳細介紹

商品詳細介紹:

4.細胞簡介:

分離自皮膚組織;皮膚肥大細胞廣泛分布于皮膚微血管周圍,分泌多種細胞因子,參與免疫調節(T細胞、B細胞、APC細胞活化)。皮膚肥大細胞表達MHC分子、B7分子,具有APC功能。表達大量的IgE-Fc受體,釋放過敏介質。具有弱吞噬功能,和血液的嗜堿粒細胞同樣,具有強嗜堿性顆粒的組織細胞。存在于血液中的這類顆粒,含有肝素、組織胺、5-羥色胺,由細胞崩解釋放出顆粒以及顆粒中的物質,可在組織內引起速發型過敏反應(炎癥)。由于在肥大細胞上結合的IgE抗體和抗原的接觸,使細胞多陷于崩壞。肥大細胞呈圓形或卵圓形,細胞核小,呈圓形或橢圓形,染色淺,位于細胞中央。細胞常成堆或單個分布于血管附近。細胞呈圓形或卵圓形,細胞質中充滿大小一致、染成藍紫色的顆粒,均勻分布在核周圍。

5.方法簡介:

實驗室分離的采用膠原 - 胰dan白混合消化法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測:

實驗室分離的經CD117免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養信息:

培養基  FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率    2-3天換液一次

生長特性  貼壁

細胞形態  圓形、梭形、多角形

傳代特性  可傳1-2代

消化液  0.25%胰dan白

培養條件  氣相:空氣,95%;CO2,5%

產品屬性:

產品名稱

規格

組織來源

人皮膚肥大細胞

5×105cells/T25細胞培養瓶

皮膚組織

1.png

實驗報告:

一、分離與培養:

二、免疫熒光鑒定:


   1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大小;
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
   3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織被消化;
   4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
   5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

 

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
   2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
   3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
   5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
   6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

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人皮膚肥大細胞原代平滑肌細胞低血清培養體系英文名稱:原代平滑肌細胞低血清培養體系100mL

原代平滑肌細胞低血清培養體系英文名稱:原代平滑肌細胞低血清培養體系500mL

原代平滑肌細胞培養體系英文名稱:原代平滑肌細胞培養體系100mL

原代平滑肌細胞培養體系英文名稱:原代平滑肌細胞培養體系500mL

原代神經元細胞培養體系英文名稱:原代神經元細胞培養體系100mL

原代神經元細胞培養體系英文名稱:原代神經元細胞培養體系500mL

原代少突膠質細胞培養體系英文名稱:原代少突膠質細胞培養體系100mL
操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基,90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

 


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