一、細胞基本屬性

細胞詳述

滑膜是關節囊的內層，淡紅色，平滑閃光，薄而柔潤，由疏松結締組織組成。關節腔內的所有結構，除關節軟骨、半月軟骨板以外,即便是通過關節腔的肌腱、韌帶等均全部為滑膜所包裹。

滑膜分泌滑液，在關節活動中起重要作用。正常滑膜分為兩層，即薄的細胞層(內腔層)和血管層(內膜下層)，是血管豐富的關節囊內膜，貼附于非關節面部分，覆蓋于關節囊內的骨面上，不在軟骨面上，此部分稱為邊緣區或“裸區"。滑膜呈粉紅色，光滑發亮、濕而潤滑，有時可見絨毛，內含膠原性纖維。

滑膜細胞有A、B兩型。巨噬細胞樣A型細胞，表面有絲狀偽足、漿膜內陷、囊泡、線粒體、溶酶體、胞漿纖維和高爾基體，具有吞噬功能；B型成纖維

樣滑膜細胞(FLS) ，有高濃度的內質網結構，是介導 RA 關節破壞的主要細胞。

 該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶SV40基因。

注意事項：  收到細胞后第一次傳代建議1：2傳代，充液培養基是維持培養基，不能用來培養細胞。

細胞特性

1）細胞來源于手術取得的患風濕性關節炎病人的關節滑膜組織。

2) 細胞鑒定：纖維連接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色為陽性。

3) 經鑒定細胞純度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

5) 細胞生長方式：成纖維樣細胞，貼壁培養。

二、細胞培養狀態

發貨時發送細胞電子版照片

三、使用方法

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；

4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化；

3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內；

4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。

5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

四、注意事項

1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養過程中，消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和技術部溝通；由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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