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人δ氨基酰酸脫水酶(ALAD)CLIA試劑盒操作流程

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                      人δ氨基酰酸脫水酶(ALAD)CLIA試劑盒操作流程

如果說,燕子是報春的天使,那么落葉就是迎秋的頑童。秋天一到,落葉就毫不猶豫地從樹丫上紛紛飄下來。它們好像在對大樹說:親愛的媽媽,我們要回到大地的懷抱中去,請允許我們隨風阿姨飛吧!樹發出沙沙的聲音,似乎在說:走吧!走吧!葉子飛過墻頭,來到野外,看!大地上到處都有它們的身影。落葉,你給地面鋪上了一層金地毯。接下來介紹人δ氨基酰酸脫水酶(ALAD)CLIA試劑盒操作流程

特點;

靈敏度:有二層含義,1)為試劑檢出被檢物質的低量的能力;2)為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力。

特異性:常用交叉反應率表示。含有與待測物相近結構部份的物質可能存在交叉反應,使測定結果升高,可能導致假陽性,所以交叉反應是評價其質量的關鍵指標。

精密度:ELISA試劑一般指其批內CV%,其值應小于15%;定量試劑應同時考察線性范圍。 

準確度:通過添加回收實驗進行評價。

簡便性:指在不影響試劑的前三項指標的前題下,實驗和測定步驟越少越好,在定性實驗中結果判斷簡單明了,定量試驗結果計算也應簡單。

安全性:指試劑對操作者和環境安全無害無傳染性。

經濟性:試劑在同等質量條件下通過大規模或技術進步降低成本,而市場價格比較合理。

試劑評價:需要有的確證方法和確證的樣品進行檢測。

操作步驟:

1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。 6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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