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血清的儲存與應用探究
閱讀:126 發布時間:2024-3-18血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養條件不同而異。血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度、滲透壓等作用。實驗室準確的應用及保存血清,才能使血清施展應有的效果。
一、血清儲存:
1.應用前處理:大部分血清在應用前必需滅活處置,即560C30分鐘。滅活的目標是去除血清中的補體身分,防止補體對細胞發生毒性同化。血清顛末滅活也會喪失一些對細胞無利的成分,如發展因子,是以也有人提出血清不經滅活間接用于造就,這樣做的前提是確認血清中不含補體身分。對付一些品德高的胎牛血清和新牛血清能夠斟酌不經滅活間接用于細胞造就。
2.應用濃度:自從有了分解造就基,血清便是作為一種增加身分與分解造就基混雜應用,應用濃度一樣平常為5-20},最罕用是10}。過量血清容易使造就中的細胞發生變更,特別是一些二倍體的無窮細胞系,敏捷發展以后容易發生惡性轉化。
3.貯存條件:血清一樣平常貯存于一200C,同時應防止重復凍融。購置大包裝的血清后,首先要滅活處置,而后分裝成小包裝,貯存于一200C,應用前熔化。熔化時最好現置于40C。熔化后的血清在40C不宜長期寄存,應盡快應用。
4.選購血清時,先從供應商處討取樣品停止實驗,選定一批后就要保存充足應用6個月至1年的量,直至用另一批顛末事后實驗的樣品取代。
二、血清的解凍:
當血清需要被解凍時,我們不建議大家把剛從-20℃中拿出的冰凍血清,直接放入4℃冰箱中過夜融化,也不要在室溫進行過夜解凍。
由于血清含有蛋白質等干物質,這類物質容易先融化析出,水這類溶劑后融化,導致血清產生沉淀,影響使用效果。
因此,要盡可能保證所有成分同步融化,因此我們建議使用三步法融化。
需要注意的是,如果血清是儲存在-80℃冰箱中,三步法解凍前,應先將血清轉移至-20℃冰箱中存放1-2天。
一次解凍后,分裝至無菌離心管中,盡量保證每管是一次的用量,分裝管解凍也遵循三步法,解凍后需全部用完。
三、血清的應用:
1、血清的熱滅活:
血清進行熱滅活的目的是,利用較高的溫度使補體失活。由于胎牛血清會嚴格控制采血時間為5-8月齡的胎牛,此時還未形成完整的補體系統,因此,合格的胎牛血清,是不需要滅活的。
但是實驗中如果需要新生牛血清、小牛血清、豬血清或馬血清這些血清時,則需要根據實驗要求而定。
根據血清廠家多年來總結的經驗,常規解凍后,40℃水浴加熱20分鐘即可,能夠盡可能地保留營養成分。
2、細胞培養的應用:
對于新的細胞系或從無血清培養轉變到胎牛血清培養的細胞系,需要進行適應期。在初始適應期,可以將血清濃度逐漸降低,直到細胞適應無血清培養為止。
3、關注血清的批次:
相同品牌的胎牛血清,在蛋白質含量等方面,可能會存在批次差異,因此在同一實驗中最好使用來自同一批次的血清,以減少變異性。如果不得不使用不同批次的胎牛血清,請進行驗證實驗以確保結果的可重復性。