詳細介紹
細胞名稱 SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-7培養
形態特性 成纖維細胞樣
品牌 貼壁生長
特征特性 該細胞株源自CV-1細胞株,經轉染起始點缺失的SV40病毒突變體得到;編碼表達野生型T抗原,所以該細胞適合作為需要SV40 T抗原表達的載體的轉染宿主。該細胞表達T抗原,允許SV40病毒的溶解性生長,支持40℃時溫度敏感性A209病毒的復制,支持起始區域缺陷的SV40突變體的復制。因含有SV40病毒的DNA序列,該細胞需要在2級生物安全柜中操作。
培養條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H
SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-7培養貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養瓶內,加入*培養基后繼續培養或實驗。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養。
1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d,繪制細胞生長曲線
Anti-EGFR /Gold 金標記表皮生長因子受體抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.5ml
Anti-MYL3/Myosin light chain 3/Biotin 生物素標記 肌球蛋白輕鏈3抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh C2orf57 2號染色體開放閱讀框57抗體 規格 0.2ml
CCR-1(CC chemokine receptor 1) 細胞表面趨化因子受體1抗原 0.5mg
HDL 英文名稱: 高密度脂蛋白抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh SAMD9 SAMD9蛋白抗體 規格 0.2ml
Anti-MYL3/Myosin light chain 3/Biotin 生物素標記 肌球蛋白輕鏈3抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Inhibin Alpha 抑制素α抗原Multi-class antibodies規格: 0.5mg
Anti-AEV(Avian Encephalomyelitis virus) 禽腦脊髓炎病毒AEV抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-Cdc25B (Ser149) 磷酸化細胞分裂周期蛋白25B抗體 規格 0.1ml
溴化已錠染色液 -紅色 1ml Sigma原料,自產
Wnt1 英文名稱: 信號通路Wnt1抗體 0.1ml
Dynorphin A 英文名稱: 腦啡肽A抗體 0.2ml
Anti-AEV(Avian Encephalomyelitis virus) 禽腦脊髓炎病毒AEV抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml
Rabbit Anti-human sIgA/Bio 生物素標記的兔抗人分泌型IgA 0.1ml
FNBP1L 英文名稱: FNBP1L蛋白抗體 0.2ml
DEK癌基因結合蛋白 anti-DEK oncogene 0.1ml
Anti-PAX9/FITC 熒光素標記配對盒基因9抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Troponin I(Ser23/24) 磷酸化鈣調節蛋白-1抗體 規格 0.1ml
Goat Anti-Guinea IgG/FITC 熒光素標記羊抗豚鼠IgGMulti-class antibodies規格: 0.3ml
B7-2/sCD86 ELISA Kit 大鼠可溶性CD86Multi-class antibodies規格: 48T
Anti-VEGFR1 血管內皮生長因子受體1抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh gamma Synuclein 核突觸蛋白-γ抗體 規格 0.1ml
EG-VEGF(Human Endocrine gland vascular endothelial growth factor) ELISA Kit 人內分泌腺來源的血管內皮生長因子 96T
NOX2 英文名稱: NADPH氧化酶2抗體 0.1ml
phospho-ATG3 (Tyr18) 英文名稱: 磷酸化自噬相關蛋白3抗體 0.1ml
Anti-VEGFR1 血管內皮生長因子受體1抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內,加入*培養基繼續培養,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養基,輕輕吹勻后,分置其它培養瓶內加入*培養基繼續培養。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。