詳細介紹
細胞名稱 小鼠小膠質細胞;BV2培養
形態特性 上皮細胞樣
品牌 貼壁生長
特征特性 BV-2由E.Blasi年建立于1990年。該細胞由小鼠小神經膠質細胞經逆轉錄病毒介導轉染v-raf/v-myc獲永生化。該細胞系保留有小神經膠質細胞多種形態,表征,和功能特征。免疫組化結果顯示細胞為MAC1,MAC2陽性,而MAC3,膠質細胞原纖維酸性蛋白,半乳糖腦苷脂為陰性。
培養條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C7
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR STR鑒定
同工酶
染色體
使用權限 A類
小鼠小膠質細胞;BV2培養操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養。
1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d,繪制細胞生長曲線
貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養瓶內,加入*培養基后繼續培養或實驗。
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內,加入*培養基繼續培養,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養基,輕輕吹勻后,分置其它培養瓶內加入*培養基繼續培養。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。
Anti-MPO /FITC 熒光素標記髓過氧化物酶抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Anti-TTF-2/FITC 熒光素標記甲狀腺轉錄因子-2抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh 5HTR2C 5-羥色胺受體2C抗體 規格 0.2ml
Mouse Anti-rat IgG/RBITC 羅丹明標記的小鼠抗大鼠IgG 0.3ml
G Protein alpha Inhibitor 1 英文名稱: G蛋白α抑制蛋白1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh PTN/Pleiotrophin 多效生長因子抗體 規格 0.1ml
Anti-TTF-2/FITC 熒光素標記甲狀腺轉錄因子-2抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
PDI(Human Protein disulfide-isomerase precursor) ELISA Kit 人蛋白二硫化物異構酶前體Multi-class antibodies規格: 48T
Anti-Phospho-p40phox (Thr154) 磷酸化嗜中性粒細胞胞漿因子4抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh IL-28B/IL-28C 白細胞介素28B抗體 規格 0.2ml
MSA(Human mitotic spindle apparatus antibody) ELISA Kit 人抗紡錘體抗體 96T
phospho-P53(Thr18) 英文名稱: 磷酸化抑制基因P53抗體 0.1ml
Carboxypeptidase B1 英文名稱: 胰羧肽酶B1抗體 0.1ml
Anti-Phospho-p40phox (Thr154) 磷酸化嗜中性粒細胞胞漿因子4抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
SPHK1 英文名稱: 鞘醇激酶1抗體 0.2ml
EGFL8 英文名稱: 表皮生長因子樣蛋白8抗體 0.2ml
磷酸酯酶-2Ac抗體 Anti-PP2Ac 0.1ml
Anti-Survivin/FITC 綠色熒光素標記Survivin蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-MSK1 (Ser376) 磷酸化有絲分裂原和應激活化型蛋白激酶1抗體 規格 0.1ml
GSK-3 Beta(NT) (Glycogen Synthase Kinase-3 Beta) 糖原合酶激酶-3β(抗原)Multi-class antibodies規格: 0.5mg
cath-K(Human Cathepsin K) ELISA Kit 人組織蛋白酶KMulti-class antibodies規格: 48T
Anti-phospho-M-CSF Receptor(Tyr708) 磷酸化巨噬細胞集落刺激因子受體抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh JNK2 氨基末端激酶2抗體 規格 0.2ml
cAMP ELISA Kit 大鼠環磷酸腺苷 96T
APRIN 英文名稱: 雄激素誘導增殖抑制蛋白抗體 0.2ml
C3orf38 英文名稱: 3號染色體開放閱讀框38抗體 0.2ml
Anti-phospho-M-CSF Receptor(Tyr708) 磷酸化巨噬細胞集落刺激因子受體抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml