詳細介紹
產品僅用于科研注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 轉基因品系棉花GK19染料法qPCR試劑盒 |
英文名稱 | GK19 dye qPCR kit for transgenic cotton |
貨號 | YSP96689 |
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產品說明書 1份PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區,其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
產品僅用于科研不需要分離病毒或細菌及培養細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論。
基質金屬蛋白酶7(MMP7)(學發光免疫分析法)Isopteropodine(Uncarine E)純度:>98%
基質金屬蛋白酶7(MMP7)(學發光免疫分析法)Isopteropodine(Uncarine E)純度:>98%
基質金屬蛋白酶7(MMP7)(學發光免疫分析法)Licoricesaponin G2 (24Hydroxyglycyrrhizin)純度:>98%
基質金屬蛋白酶7(MMP7)(學發光免疫分析法)Licoricesaponin G2 (24Hydroxyglycyrrhizin)純度:>98%
基質金屬蛋白酶7(MMP7)(學發光免疫分析法)Licoricesaponin H2 (Liquiritinic acid diglucoside)純度:>98%
基質金屬蛋白酶7(MMP7)(學發光免疫分析法)Licoricesaponin H2 (Liquiritinic acid diglucoside)純度:>98%
基質金屬蛋白酶7(MMP7)(學發光免疫分析法)Malvidin 3arabinoside chloride純度:
E1 glycoprotein 風疹病毒糖蛋白 * 0.2ml Analgin
GM1(GS) 神經節苷酯 * 0.1ml Empagliflozin; BI10773
GMCSF 粒細胞巨噬細胞克隆刺激因子 * 0.1ml BQ123
GMCSF 粒細胞巨噬細胞克隆刺激因子 * 0.1ml diatrizoic acid
GMCSFR alpha/CD116/CSF2RA 粒細胞巨噬細胞集落刺激因子受體α * 0.2ml Glycopyrrolate
GMCSFR β/CSF2RB 粒細胞巨噬細胞集落刺激因子受體β * 0.2ml Sulfanilamide
phosphoCSF2RB (Tyr766) 粒細胞巨噬細胞集落刺激因子受體β * 0.1ml Sulfadiazine
cGMP 環鳥苷 * 0.2ml Sulfadiazine
轉基因品系棉花GK19染料法qPCR試劑盒DEK癌基因結合蛋白 英文縮寫:Cytomegalovirus (CMV)PP65
PSD95結合蛋白1抗體 英文縮寫:Cytomegalovirus pp65
PSD95結合蛋白2抗體 英文縮寫:Cytosine deaminase
PSD95結合蛋白4抗體 英文縮寫:D.Aspartic acid
雙PHD-D4鋅指蛋白2抗體 英文縮寫:D4 GDI
雙特異性磷酸酶22抗體 英文縮寫:D53
Erdj5/DNAJC10蛋白抗體 英文縮寫:DAAM1
腫瘤細胞調亡素/腫瘤壞死因子受體死亡受體6抗體 英文縮寫:DAAM2
跨膜TMIGD1蛋白抗體 英文縮寫:Dab1
軸絲中鏈動力蛋白抗體 英文縮寫:DAB2
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATG隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。