久久99精品视频一区,把老师下面日出水视频,国产成人欧美日韩在线电影,外国特级AAAA免费

小鼠卵巢顆粒細胞培養步驟:

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備MEM培養基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3.按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

 土生拉烏爾菌（土生克雷伯菌）

 解藻弧菌（溶藻弧菌）

 洋蔥伯克霍爾德氏菌

 霍亂弧菌

 日勾維腸桿菌

 施氏假單胞菌

 表皮葡萄球菌

 拜氏梭菌

 馬鏈球菌獸疫亞種

 壞死梭桿菌壞死亞種

 泛養副球菌

 解淀粉芽孢桿菌

 乳酸片球菌

 戊糖片球菌

 朝鮮芽孢八疊球菌

 宋氏志賀氏菌

 木醋桿菌

 明亮發光桿菌

 空腸彎曲桿菌

 嗜酸乳桿菌

 干酪乳桿菌

  耐鹽芽孢桿菌

 無乳鏈球菌

 德氏乳桿菌乳酸亞種（萊氏曼氏乳桿菌）

 斯氏李斯特氏菌

 側孢短芽孢桿菌

 乳酸乳球菌乳亞種

 牙齦卟啉單胞菌

 菩提奇異球菌

 干燥棒桿菌