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人喉癌上皮細胞；Hep-2圖片【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱

人喉癌上皮細胞；Hep-2圖片

形態(tài)特性  上皮細胞樣

生長特性 貼壁生長

特征特性  初認為這個細胞源自喉上皮癌，但隨后通過同工酶分析、HeLa標記染色體和DNA指紋分析發(fā)現(xiàn)，該細胞已被HeLa污染；角蛋白陽性。

培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS

傳代方法  1:3傳代,2-3天傳一代

傳代情況 C360

凍存條件  基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測 陰性

STR

同工酶 同工酶鑒定

染色體

使用權限 A類

人喉癌上皮細胞；Hep-2圖片細胞培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。

2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二、細胞處理：

1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。

2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。

人喉癌上皮細胞；Hep-2圖片質量保證:

我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，*進口來源，*保證5代以內，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內出現(xiàn)任何問題，導致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。

人喉癌上皮細胞；Hep-2圖片操作步驟：

1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內，吸除或倒掉細胞瓶內舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。

2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉移到無菌離心管內，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白抗體IgG(LF/LTF Ab-Ig)ELISA試劑盒    進口/分裝    Human Lactoferrin antibody IgG,LF/LTF Ab-IgG ELISA Kit

人抗殺菌通透性增高蛋白抗體(BPI-Ab)ELISA試劑盒    進口/分裝    Human anti-Bactericidal permeability increasing protein antibody,BPI-Ab ELISA Kit

人髓過氧化物酶特異性抗中性粒細胞胞質抗體IgG(MPO-ANCA IgG)ELISA試劑盒    進口/分裝    Human Mouse myeloperoxidase-antineutrophil cytoplasmic antibody IgG,MPO-ANCA IgG ELISA Kit

人抗蛋白酶3抗體IgG(PR3 Ab-IgG)ELISA試劑盒    進口/分裝    Human Anti-proteinase 3 antibody IgG,PR3 Ab-IgG ELISA Kit

人喉癌上皮細胞；Hep-2圖片Y1090 菌種1mL

磷酸二酯酶Ⅰ100U

0.5mLDNA 離心超濾管 (300-500 KD)1個

CAS53597-25-4魚精蛋白硫酸鹽1g

CAS69-78-35,5- 二硫代雙 (2- 硝基苯甲酸 )1g

β －瓊脂糖酶25U