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行業(yè)產(chǎn)品
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參 考 價 | 面議 |
產(chǎn)品型號
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所 在 地上海市
更新時間:2023-03-20 11:16:43瀏覽次數(shù):173次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
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貨號 | GOY-01D2481 | 應用領域 | 化工 |
主要用途 | 僅供科研實驗 | 英文名稱 | Recombinant 5',3'-Nucleotidase, Cytosolic (NT5C) |
物種 | Mus musculus (Mouse,小鼠) |
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產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 物種 | 貨號 |
胞漿-5',3'-核苷酸酶(NT5C)重組蛋白小鼠 | Mus musculus (Mouse,小鼠) | GOY-01D2481 |
英文名稱:Recombinant 5',3'-Nucleotidase, Cytosolic (NT5C)
DNT; DNT1; P5N2; PN-I; PN-II; UMPH2; cdN; 5'Nucleotidase,Deoxy(Pyrimidine)Cytosolic Type C; Uridine 5-Prime Monophosphate Hydrolase 2; 5'(3')-deoxyribonucleotidase, cytosolic
型號:GOY-01D2481
酶與激酶
物種:Mus musculus (Mouse,小鼠)
來源:原核表達
宿主E.coli
內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)
亞細胞定位::n/a
預測分子量:25.5kDa
實際分子量:-(差異分析請參閱說明書)
片段與標簽:Asp12~Leu200 with
緩沖液成份:磷酸鹽緩沖液(pH7.4,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.)
性狀:凍干粉
純度:> 95%
等電點:-
應用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg
蛋白表達及純化:
1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞,然后將重組質粒轉染到細胞中,通過瞬時表達產(chǎn)生目標蛋白。
2.收集含有目標蛋白的部分(細胞或培養(yǎng)上清)。
3.通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產(chǎn)品質量。
5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
交付內(nèi)容:純化好的目標蛋白及純化報告。可按客戶要求提供含純化標簽(Tag)或切除純化標簽(Tag)的最終蛋白,純度最高可達90%以上。
操作步驟:
Ⅰ 實體組織蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
2. 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,注意低溫操作;
3. 取組織勻漿液轉移到1.5mL預冷的離心管,離心10000轉/分,4℃離心5 min;
4. 取上清轉移至新的預冷的離心管中,即為全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取
1. 貼壁培養(yǎng)的細胞,吸去培養(yǎng)基后,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液;
2. 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中, 1000轉/分離心10 min,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,1000轉/分離心5 min洗兩次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
4. 細胞洗滌后,轉至新的預冷的離心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
細胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個 | 0.5 mL~1 mL |
5×106個 | 0.2 mL~0.5 mL |
5.置于4℃搖床平臺上,溫和振蕩15 min;
6. 14,000rpm,4℃離心15min,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。
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1mL 胰凝抑制劑溶液,20mg/mL Chymostatin Solution -20℃保存
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1mg 梭菌蛋白 Clostripain 4℃保存
50T 綿羊肺腺瘤病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
2 ug pLOX-CW-CRE pLOX-CW-CRE 低溫運輸,-20℃保存
人百日咳病毒抗體(IgM)免疫試劑盒進口、分裝
500mL PIPES Buffered Saline,5X,pH6.5 PIPES Buffered Saline,5X,pH6.5 常溫保存
基因工程大腸桿菌培養(yǎng)基
0.1mL 細胞松弛素B溶液,20mg/mL Cytochalasin B Solution -20℃避光保存
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