蛋白表達及純化：

1.培養500ml哺乳動物細胞，然后將重組質粒轉染到細胞中，通過瞬時表達產生目標蛋白。

2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養上清）。

3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。

交付內容：純化好的目標蛋白及純化報告?？砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶撕灒?/span>Tag）或切除純化標簽（Tag）的最終蛋白，純度最高可達90%以上。

產品屬性：

英文名稱：Recombinant Endothelial NOS (eNOS)

NOS3; ECNOS; NOS III; E-NOS; C-NOS; ENOS; CNOS; Constitutive NOS; Nitric Oxide Synthase 3, Endothelial

型號：GOY-01D358

酶與激酶

心腦血管

物種：Sus scrofa; Porcine (Pig，豬)

來源：原核表達

宿主E.coli

內毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細胞定位：：Membrane, caveola. Cytoplasm, cytoskeleton. Golgi apparatus. Cell membrane

預測分子量：21.9kDa

實際分子量：21kDa(差異分析請參閱說明書)

片段與標簽：Ala522~Phe705 (Accession # Q28969) with

緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）

性狀：凍干粉

純度：> 95%

等電點：6.1

應用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規格10μg50μg200μg1mg5mg

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操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉移到1.5mL預冷的離心管，離心10000轉/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉移至新的預冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。

Ⅱ 培養細胞蛋白提取

1． 貼壁培養的細胞，吸去培養基后，加入10mL/150mm培養板的冷PBS洗兩次，每次振搖數次以盡量去除培養液；

2． 懸浮培養的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養液移至離心管中， 1000轉/分離心10 min，再用10mL/150mm培養板的冷PBS，1000轉/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數分鐘待用。

4． 細胞洗滌后，轉至新的預冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。

公司正在出售的產品：

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碳水化合物磺基轉移酶11抗體 CHST11

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大鼠食管上皮細胞培養基釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

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嗜熱鏈球菌 Streptococcus thermophilusHL-60, 人早幼粒白血病細胞

依維林鏈霉菌 Streptomyces iverini釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

香菇 Lentinula edodes凍膠假絲酵母 Candida gelida

顯影粉刺孢吸水鏈霉菌 Streptomyces hygrospinosus

NRK(大鼠腎細胞)粟酒裂殖酵母 Schizosaccharomyces pombe

蘇云金芽孢桿菌 Bacillus thuringiensis黑木耳 Auricularia auricula

亮白曲霉 Aspergillus candidus小鼠成骨細胞培養基

PBS圓弧青霉 Penicillium cyclopium

苜蓿中華根瘤菌炭黑曲霉 Aspergillus carbonarius

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum猴菌