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即用型 PCR 試劑盒 2.0 1 mL成分產品及特點:
易錯 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當的選擇方法,則可從構建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規 PCR 的比較如下:本產品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發,本產品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學研究領域顯示出了它的*性。
2. 配方經過精心優化,突變率穩定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設計位點,則可使產物克隆到表達載體,也可以用于體內蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續易錯 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增 1kb 以下的產物,對于 1kb 以上的產物,建議分段擴增。
即用型 PCR 試劑盒 2.0 1 mL成分產品介紹:
規格及成分:
使用方法:
1. 以 30 uL 的標準 PCR 反應體系為例,如果反應體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補水到 30 uL
2. 按已經優化的 PCR 條件進行一定循環數的 PCR(循環數與突變率的關系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯 PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結束后做延伸處理。
3. 電泳檢測是否得到預計長度的 PCR 產物。
pCMV6-AC-IRES-GFP-Puro(pCMV6ACIRESGFPPuro)
pcos5EMBL
pDB.His.TRX
pDRf1-GW(pDRf1GW)
pECFP-Nuc(pECFPNuc)(60908-2553)
pESC-LEU (pESCLEU )(60908-2752)
pET-3xc(pET3xc)
pET23-CBD-(-PP)-EGFP-H246,249D(pET23CBDPPEGFPH246249D)
pFA6a-3HA-His3MX6(pFA6a3HAHis3MX6)鞘氨醇桿菌屬 Sphingobacterium sp.
黑曲霉 Aspergillus niger
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
RH-35(大鼠肝細胞)5×106cells/瓶×2
桿菌屬 Lactobacillus sp.
根瘤菌
TRX標簽蛋白裂解液100ug20μg、100μg
酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp. lactis
甜菜生尾孢
枯草芽胞桿菌 Bacillus subtilis
HCC827(人非小細胞肺細胞)5×106cells/瓶×2
酸球菌霍氏亞種 Lactococcus lactis subsp. Hordniae
苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti
SDS-PAGE Loading Buffer (非還原,5x)10ml國產
戊糖桿菌 Lactobacillus pentosus
毛柄金錢菌(金針菇) Flammulina velutipes
蘇云金芽胞桿菌蘇云金變種 Bacillus thuringeinsis subsp. thuringeinsis
彈性蛋白酶(含10mL酶解緩沖液)1mL
泡盛曲霉 Aspergillus awamori
pFGC5941
pGADT7-Rec (linearized)(pGADT7Rec)
pGEX-6P-2(pGEX6P2)(60908-3840)
pGL4.40[luc2P MRE Hygro]
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