雜交瘤細胞株；49-2圖片【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 雜交瘤細胞株；49-2圖片
形態特性  淋巴母細胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性  該細胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開。 
培養條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件  基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權限 未定

細胞培養步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。
2、培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產品全部經過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內出現任何問題，導致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內，吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉移到無菌離心管內，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養。

TPA/PLAT  組織型纖溶酶原激活劑抗體規格: 0.1ml
phospho-CHEK1 (Ser280)  磷酸化細胞周期檢測點激酶1抗體規格: 0.1ml
stabilin1/STAB 1  淋巴管內皮細胞和血管內皮細胞受體1抗體規格: 0.2ml
Phospho-SHP2/SHIP2(Tyr81)  磷酸化蛋白酪氨酸磷酸酶2抗體規格: 0.1ml
Cdc6  細胞分裂周期蛋白6抗體規格: 0.1ml
TNFAIP2  瘤壞死因子誘導蛋白2(TNFα-IP 2)抗體規格: 0.2ml
Phospho-RSK3 (Thr353/356)  磷酸化核糖體蛋白S6激酶家族RSK3抗體規格: 0.1ml
CD43/SPN  CD43抗體規格: 0.1ml
KDEL (ER Marker)  賴氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，亮氨酸相關序列抗體規格: 0.2ml
ALDH2/ALDHI  乙醛脫氫酶2抗體規格: 0.2ml
phospho-NDEL1(Thr219)  磷酸化中心粒蛋白Nudel抗體規格: 0.1ml
Nucleostemin  核干細胞因子抗體(鳥嘌呤核苷酸結合蛋白3)規格: 0.2ml
X protein/HB-X (middle)  抗乙肝病毒X蛋白抗體規格: 0.2ml
Protective protein  組織蛋白酶A抗體規格: 0.1ml
ZNF23  鋅指蛋白23抗體規格: 0.2ml
Phospho-PLC gamma 2(Tyr753)  磷酸化磷酯酶Cγ2抗體規格: 0.1ml
phospho-RAD9(Ser328)  磷酸化細胞周期檢查控制蛋白質抗體規格: 0.1ml
AQP0/MIP26  水通道蛋白0抗體規格: 0.1ml2mL        殼聚糖磁珠
1g        α- 糜蛋白酶
100mL        DMEM 培養基 ( 高糖，含 10% 胎牛血清 )
50 次        柱式植物油 DNAout
基因轉染增強劑    0.5 mL    140621-0.5
DNA 電泳分子量標準 200-1500 bp)    50 次    70503C-50
50μL        生物素標記 dUTP 溶液
100mL        電泳甘油
10mg        apo- 轉鐵蛋白
50U        Furin 蛋白酶
金胺 O    5g    CAS2465-27-2
lambda(λ)DNA    5μg    90407C-5
50mg        小牛胸 DNA
50 只        硅膠膜離心吸附柱 ( 小提 ) 收集管
25mL        聚乙二醇溶液
10mL        Sephadex G50 介質
四甲基乙二胺    25mL    CAS110-18-9
TG1 菌種    1mL    12-44
50 次        一步法質粒 DNAout 2.0
0.5 mL        基因轉染增強劑
10g        甘氨酸二肽
50 次        脈沖電泳 Marker( 酵母染色體 PFG)