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小鼠胚胎成纖維細胞;STO價格質量保證:
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產品全部經過QC檢測,100%進口來源,100%保證5代以內,活力>95%,無細菌、真菌、支原體污染。 細胞到達客戶手中,1個月內出現任何問題,導致細胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
小鼠胚胎成纖維細胞;STO價格操作步驟:
1)貼壁細胞傳代:提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內,吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液,加少量PBS潤洗細胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養基,晃動細胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液。控制吹打的力度,避免產生大量的氣泡,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養,隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉移到無菌離心管內,1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養基,用吸管小心吹散沉淀,制成細胞懸液,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱
形態特性 成纖維細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 STO是一株繼代生長的胚成纖維細胞系,可用于制備飼養層細胞(feeder layers)和其他研究。
培養條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C4
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶 同工酶鑒定
染色體
使用權限 A類
細胞培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優質胎牛血清,10%。
2、培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理:
1、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養)。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時,應將細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
5-TAMRA[5-羧基四甲基羅丹明] 單體5-TAMRA [5-Carboxytetramethylrhodamine] Single isomer
Tide Quencher 1氨基磷酸酯[TQ1氨基磷酸酯]Tide Quencher 1 phosphoramidite [TQ1 phosphoramidite]
EDANS標記的Asp天冬氨酸FMOC-Asp(EDANS)-OH
酪蛋白,TAMRA標記Casein, TAMRA-conjugated
ReadiUse 丙磺舒,鹽 水溶性ReadiUse probenecid, sodium salt Water-soluble
氯離子熒光探針光澤精 [N,N二甲基二吖啶硝酸鹽]lucigenin [Bis-N-methylacridinium nitrate]
iFluor 514琥珀酰SEiFluor 514 succinimidyl ester
ROS Brite 700 體內成像優化的ROS Brite 700 Optimized for in Vivo Imaging
iFluor 555 酰肼iFluor 555 hydrazide
Cyanine 5。5 單酸 [相當于Cy5。5酸]Cyanine 5。5 mono acid [equivalent to Cy5。5 acid]
5-ROX, SE [5-羧基-X-羅丹明 琥珀酰亞胺酯]單體5-ROX, SE [5-Carboxy-X-rhodamine, succinimidyl ester] Single isomer
磺胺噻挫-KLH偶聯物[用于ELISA]Sulfathiazol-KLH Conjugate
GSK 4112 (25 mg)N-[(4-chlorophenyl)methyl]-N-[(5-nitro-2-thienyl)methyl]-1,1-dimethylethyl ester-glycine; GSK 4112
BIM5078 (50 mg)1-[(2-chloro-5-nitrophenyl)sulfonyl]-2-methyl-1H-benzimidazole; BIM5078
5-trans Prostaglandin D2 (100 mg)9。alpha。,15S-dihydroxy-11-oxo-prosta-5E,13E-dien-1-oic acid; 5,6-trans PGD2; 5-trans Prostaglandin D2
n E1 Alcohol (500 ug)1,11。alpha。,15S-trihydroxy-prost-13E-en-9-one; 1-hydroxy Prostaglandin E1|PGE1 Alcohol; Prostaglandin E1 Alcohol
Fucoxanthin (5 mg)6’R,7’-didehydro-5R,6-epoxy-4’,5’,6S,7-tetrahydro-3S,3’S,5’R-trihydroxy-β,β-caroten-8(5H)-one; α-Carotene; Fucoxanthin一步式 RT-PCR Mix 1mL
即用型 EMSA 試劑盒100 次
L- 丙氨酸25g
動物種屬鑒定 PCR Mix 1100 次
CAS87-89-8肌醇100g
91204-50動植物膜蛋白微量制備試劑盒50 次
油紅 O5g
菌種保存液10 管
L- 谷胱甘肽 ( 還原型 )5g
Zenker 固定液250 mL
CAS108-95-2重蒸酚250mL
131075-10糖蛋白染色試劑盒10 次
柱式 miRNA PAGE 膠回收試劑盒50 次
Lucigenin( 光澤精 )10mg
酸性磷酸酶1g
Caspase 6 檢測試劑盒 50 次
CAS72-19-5L- 蘇氨酸25g
81215B-20一站式 Western 印跡套裝 (AP 顯色法 )20 次
β- 環狀糊精5g
m7G(5´)ppp(5´)G 帽結構類似物25 OD
L- 蘋果酸25g
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