人橫紋肌肉瘤細(xì)胞；A-204圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人橫紋肌肉瘤細(xì)胞；A-204圖片
形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞系源自一位患有橫紋肌肉瘤的1歲女孩的肌肉組織，由D.J. Giard建立。 
培養(yǎng)條件  McCoy's 5A Media (Modified with Tricine)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C6
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR  STR鑒定
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

胰酶消化液 ( 含 EDTA)100mL
雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒100 次
131022-0.5鏈霉親和素，AP 標(biāo)記0.5mL
101005-100即用型易錯(cuò) PCR 試劑盒100 次
兔抗雞 IgY，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記300μL
Furin 蛋白酶50U
遺傳100mg
LB 平板培養(yǎng)基 (Tet 抗性 )10 塊
CAS9000-91-3β- 淀粉酶100g
4610-2克必隆 G 載體2μg
纖維素酶1g
谷胱甘肽還原酶檢測(cè)試劑盒100 次 
尿苷 -5'- 二磷酸25mg
免 DNA 提取 PCR 試劑盒100 次
CAS9011-18-1硫酸葡聚糖10g
12-248Rosetta 菌種1mL
液體樣品 RNAout250 次
JM103 菌種1mL鵝白介素4(IL-4)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
大鼠胰高血糖素樣肽1(Glp-1)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
大鼠性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
大鼠酸性鐵蛋白（AIF）ELISA試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
大鼠皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CORT)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
大鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
大鼠甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白(PTHrP) ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
大鼠谷胱甘肽過(guò)氧化酶（GSH-Px）ELISA試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
大鼠白蛋白（ALB）ELISA試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
大鼠apelin 12(AP12)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
豬生長(zhǎng)激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
豬補(bǔ)體片斷3b(C3b)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
魚骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
小鼠載脂蛋白E(Apo-E)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
小鼠血管生成素受體Tie2(ANG-R-Tie2)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
小鼠脫碘酶(ID)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
小鼠乳頭瘤病毒18（HPV-18）ELISA試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
小鼠卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
小鼠黑色素細(xì)胞抗體(MC Ab)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝