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綠色熒光蛋白標記人宮頸癌細胞;HeLa-GFP圖片【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 綠色熒光蛋白標記人宮頸癌細胞;HeLa-GFP圖片
形態特性 上皮樣;多角
生長特性 貼壁生長
特征特性 轉染pEGFP-N1,穩定表達綠色熒光蛋白。
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS;G418 200ug/ml
傳代方法 1:3傳代;5~7天1次。
傳代情況 P5
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:9,10;D13S317:12,13.3;D16S539:9,10;D18S51:16; D19S433:13;D21S11:27,28;D2S1338:17;D3S1358:15,18;D5S818:11,12;D7S820:8,12;D8S1179:12,13;FGA:21;TH01:7;TPOX:8,12;vWA:16,18;
同工酶
染色體
使用權限 A類
細胞培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優質胎牛血清,10%。
2、培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理:
1、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養)。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時,應將細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質量保證:
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產品全部經過QC檢測,100%進口來源,100%保證5代以內,活力>95%,無細菌、真菌、支原體污染。 細胞到達客戶手中,1個月內出現任何問題,導致細胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細胞傳代:提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內,吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液,加少量PBS潤洗細胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養基,晃動細胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液。控制吹打的力度,避免產生大量的氣泡,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養,隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉移到無菌離心管內,1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養基,用吸管小心吹散沉淀,制成細胞懸液,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養。
140595-100小鼠抗 Trx 標簽蛋白單抗 100 μL
植物種屬鑒定 PCR Mix 8100 次
L- 天門冬酰胺25g
果膠25g
COX IV 小鼠單抗1000 μL
CAS7681-49-4氟化25g
81225-250Tricine-SDS-PAGE 配膠液250mL
自誘導培養基 (lac 啟動子 )200mL
羅丹明 B10g
糜蛋白酶原1 g
超氧化物試劑盒100 次
CAS9001-51-8己糖激酶2.5KU
131158-0.1山羊抗兔 IgG,熒光素 488 標記0.1mg
130829-50天凈沙細胞蛋白質 -RNA 雙提取試劑盒 50 次
N-2- 羥乙基 -N’-2- 乙基磺酸25g
5- 溴 -4- 氯 -3- 吲哚 -β-D- 半乳糖苷100mg
髓核細胞生長因子5mL
電泳過硫酸銨0.1gx10
21-0400-5星形膠質細胞生長因子5mL
90710-100RNA SDS( 十二烷基硫酸 )100gIminodiacetonitrile亞氨基二乙628-87-5
Sodium taurocholate牛磺膽酸145-42-6
HAFNIUM鉿標準溶液7440-58-6
DIRECT FAST BROWN M直接紅棕M2429-82-5
Octadecyl 3-(3,5-di-tert-butyl-4-hydroxyphenyl)propionate抗氧劑10762082-79-3
Tetrabutylphosphonium chloride四丁基化膦2304-30-5
DIETHYLAMINO HYDROXYBENZOYL HEXYL BENZOATE二乙氨基羥酰基酸己酯302776-68-7
Oxobutanedioic acid草酰乙酸328-42-7
CHLORIDE STANDARD離子(Cl-)標準溶液16887-00-6
NAECL化學發光液
2,4,6-Trimethylbenzoyl chloride2,4,6-三基酰938-18-1
2,6-DIMETHYLNAPHTHALENE二基萘28804-88-8
4-Methoxyphenylacetone對氧基基丙122-84-9
Giemsa stain吉氏色素51811-82-6
tert-Butyl hydroperoxide過氧化氫叔丁醇75-91-2
TRIFLUOROMETHANESULFONAMIDE三磺酰胺421-85-2
Oxazole-2-amine2-氨基惡唑4570-45-0
2,5,6-TRIMETHYLBENZOXAZOLE2,5,6-三基并唑19219-98-8
Calconcarboxylic acid鈣試劑羧酸3737-95-9
Litmus paper blue藍石蕊試紙
LEAD(II) SULFIDE硫化鉛1314-87-0
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