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旋毛蟲通用探針法熒光PCR檢測試劑盒實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
蝦肝腸胞蟲(EHP)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
對蝦壞死性肝胰腺炎(NHPB)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
哈維氏弧菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
傳染性造血器官壞死病毒(IHNV)RNA核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
赤點石斑魚神經壞死病毒(RGNNV)RNA核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
對蝦肝胰腺細小病毒(HPV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
錦鯉皰疹病毒(KHV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
鯉春病毒血癥病毒(SVCV)RNA核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
草魚出血病I型病毒(GCRV I)RNA核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
草魚出血病II型病毒(GCRV II)RNA核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
草魚出血病III型病毒(GCRV III)RNA核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
病毒性出血性敗血癥病毒(VHSV)RNA核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
傳染性胰臟壞死病病毒(IPNV)RNA核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
病毒性神經壞死病毒(VNNV)RNA核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
流行性造血器官壞死病病毒(EHNV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
真鯛虹彩病毒(RSIV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
流行性潰瘍綜合癥(EUS)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
羅湖病毒(TiLV)RNA核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
對蝦血細胞虹彩病毒(SHIV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
鯉浮腫病毒(CEV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
創傷弧菌核酸檢測試劑盒(恒溫熒光法)
折光馬爾太蟲核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
派琴蟲核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
溶藻弧菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
蝦肝腸胞蟲(EHP)/急性肝胰腺壞死病(AHPND/EMS)雙通道核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
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